研究背景:　　 鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方及东南亚地区常见的恶性肿瘤之一,尤以广东省珠江三角洲一带多见,严重危害我国人民的健康。目前国内外对NPC的发病因为、易感性和癌变机理进行了广泛的研究,认为NPC的发生是一个多因素、多阶段的过程,与EBV感染、化学促癌物和/或致癌物、及遗传等因素有关。临床上大部分鼻咽癌病例早期就出现颈部淋巴结转移,晚期NFC患者主要出现肝转移和骨转移,是导致患者死亡的主要因为。手术治疗、放射治疗、化学治疗是现阶段治疗NPC的主要治疗手段,随着医疗技术的发展,对该病的检测和治疗都得到不断改善,但NPC患者的五年生存率仍然不超过60％。　　 紫杉醇为一种植物药(paclitaxel,商品名Taxol),从红豆杉的树皮、树根及枝叶中提取,催化微管蛋白迅速合成微管并结合到微管上起稳定和防止微管解聚的作用,从而避免癌细胞的快速分裂,使其停止在G2期和M期直到死亡。紫杉醇也作用于巨噬细胞上的肿瘤坏死因子(TNF)受体,促使释放白细胞介素(IL)-1、TNF-2、IL-6、干扰素(IFN)-1、IFN-2对肿瘤细胞起杀伤或抑制肿瘤细胞迁移作用。毒副作用主要表现为:骨髓抑制、恶心呕吐、神经毒性、关节肌肉疼痛、脱发。　　 四君子汤组方源自于宋《太平惠民和剂局方》,是益气健脾的经典方剂,方中人参补益中气,健脾和胃为君:白术温脾燥湿为臣:佐以茯苓甘淡渗湿健脾,苓术合用,健脾除湿之功更强:使以甘草养胃和中。全方共奏健脾和胃,益气养血之功效,具有治疗荣卫气虚,脏腑怯弱的作用。现代医学研究认为,人参健脾益气作用较强,提高特异性和非特异性免疫功能最优:白术健脾益气作用较强,尤其能够明显升高血清总蛋白:茯苓有健脾益气作用,但无增加脾虚模型动物体质量的作用。　　 绿色荧光蛋白基因是从生物发光的水母克隆出来的基因,它的cDNA编码283个氨基酸残基,不需要其它蛋白辅助、不需要底物、也不需要其它因子辅佐就能发出绿色荧光。人们采用GFP稳定转染肿瘤细胞来跟踪肿瘤形成及演进的过程,极大地改善和提高了肿瘤特别是微小肿瘤在新鲜组织的可视化能力。GFP广泛应用于可视化的肿瘤动物模型,极大地推动了肿瘤的生长、发展规律的认识和研究。　　 在研究肿瘤的过程中,在实验动物体内复制出与人类肿瘤发生发展十分相似的模型也是一个非常有用的方法。原位移植技术的开展,使许多更贴近临床特征的肿瘤动物模型得以建立,包括自发骨转移的原位移植的前列腺癌、乳腺癌和肺癌,自发肝脏和淋巴结转移的结肠癌模型,以及胰腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌和肾癌的模型。合适的人类肿瘤动物模型能验证人类肿瘤的发生、发展、侵袭、转移的过程并能够开展有效的实验干预,从而弥补了人体肿瘤仅能通过活检、手术标本和尸检等进行分析的不足。但是这仍不能满足人们从活体上观察研究肿瘤演进过程的要求。　　 基因芯片(DNA芯片,DNA微阵列)技术、蛋白质组技术及生物信息学(bioinformatics)的技术的迅速兴起和应用,为分子生物学和病理学的有机结合提供了绝好的机遇。面对数量庞大的遗传信息,建立新型杂交和测序方法以进行高效、快速的检测和分析显得尤为重要。以基因芯片为代表的生物芯片技术的崛起为解决上述问题提供了光辉的前景。由于它具有体积小、包含信息丰富以及实验操作简便的特点,使得人们可以同时检测同一组织或不同组织在不同生理和病理条件下成千上万个基因的表达水平,阐明信号通路与基因表达之间的相互作用关系。　　 研究目的:　　 目前鼻咽癌的临床治疗效果仍差强人意,结构复杂难以有效手术切除、放射治疗与化学治疗中难以避开的毒副作用,均制约着患者生存质量的提高与鼻咽癌五年生存率进展。所以,以中西医结合的思路,将化疗药物与健脾补中益气中药联合用于鼻咽癌治疗,以期提高患者生存质量及肿瘤治疗效果,并进行基因表达谱分析,寻找鼻咽癌治疗候选基因就显得尤为重要。　　 方法:　　 1、构建稳定表达绿色荧光蛋白的鼻咽癌细胞系。　　 2、建立可视裸鼠鼻咽癌模型。　　 3、紫杉醇、四君子汤药物干预,寻求临床治疗鼻咽癌化疗过程中西药与中药结合的实验证据。　　 4、构建DNA基因芯片,寻找阳性对照组与联合用药组的差异表达基因,从而缩小鼻咽癌治疗的分子标志范围。　　 结果:　　 一、构建鼻咽癌细胞系CNE-GFP及裸鼠模型。　　 二、药物干预后指标检测。　　 以上实验结果表明:紫杉醇单药可有效杀伤肿瘤细胞,其毒副作用不可避免地使力竭后氧分压下降、血BUN值升高；对外周血细胞、血红蛋白、血清乳酸、免疫功能、胃肠运动均下降。四君子汤可增强机体的外周血细胞计数,改善体液免疫功能。四君子汤与紫杉醇联用,对各项指标均有显著效果,RBC计数、淋巴细胞计数、血红蛋白、血清乳酸、最初60秒速度、脾细胞抗体、胃残留率与正常对照组无差异。由此可以推测,紫杉醇与四君子汤联合应用治疗中晚期鼻咽癌,可以发挥各自优势且协同作用,通过抑制肿瘤细胞增殖、提高机体免疫力等途径对抗肿瘤细胞生长,并改善血红蛋白含量、血清乳酸含量、机体携氧运氧能力、增加血细胞计数、对抗疲劳,从而降低化疗周期中的毒副作用,在临床中可有效改善患者生存质量。　　 三、构建基因表达谱,寻找与鼻咽癌治疗有关基因。　　 得到差异表达的基因共2620个,其中差异表达在2倍以上的基因281个。对这281个基因进行基因功能分析、信号通路分析、MILANO文献分析,得到可能与鼻咽癌治疗关系密切的基因24个。这24个基因与紫杉醇、四君子汤治疗有关。　　 结论　　 1、建立稳定表达绿色荧光蛋白鼻咽癌细胞株CNE-GFP,生长曲线、运动能力实验、侵袭能力实验、同质黏附实验、异质黏附实验证明CNE-GFP细胞较其母系CNE细胞生物学特性并无改变。　　 2、裸鼠皮下注射鼻咽癌细胞CNE-GFP悬液,约两周左右可看到瘤块形成。　　 3、紫杉醇单药可有效杀伤肿瘤细胞,其毒副作用不可避免地使力竭后氧分压下降、血BUN值升高；使外周血细胞、血红蛋白、血清乳酸、免疫功能、胃肠运动下降。　　 4.四君子汤可增强机体的外周血细胞计数,改善体液免疫功能。　　 5.四君子汤与紫杉醇联用,RBC计数、淋巴细胞计数、血红蛋白、血清乳酸、最初60秒速度、脾细胞抗体、胃残留率与正常对照组无差异。由此可以推测,紫杉醇与四君子汤联合应用治疗中晚期鼻咽癌,可以抑制肿瘤细胞增殖、提高机体免疫力等途径对抗肿瘤细胞生长,并改善血红蛋白含量、血清乳酸含量、机体携氧运氧能力、增加血细胞计数、对抗疲劳,从而降低化疗周期中的毒副作用,可有效改善生存质量。　　 6.构建鼻咽癌CNE-GFP组与紫杉醇+四君子汤联合治疗组的基因表达谱,得到差异表达的基因共2620个,其中差异表达在2倍以上的基因281个,得到可能与鼻咽癌治疗关系密切的基因24个,为进一步寻找紫杉醇联合四君子汤治疗鼻咽癌的临床分子标志物缩小了范围。