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目的:探讨黄芪黄精药对中起升白作用的主要组分,它们所组成的现代组分中药,以及组分中药升高骨髓抑制小鼠白细胞的作用及其机制。
方法:
第一部分:黄芪黄精药对主要组分配伍的实验研究
采用Balb/C小鼠环磷酰胺(CTX)腹腔注射的造模法形成骨髓抑制模型,以外周血白细胞数及骨髓有核细胞数为主要指标,对黄芪黄精药对主要组分进行初步的减味药效对照研究;并对减味后各组分进行重复测量的正交设计拆方,初步筛选出在黄芪黄精药对中对升白起主效应的2个组分;最后确定两组分的最佳配伍配比,组成组分中药。
第二部分:黄芪黄精药对主要组分最佳配伍配比对骨髓抑制小鼠升高白细胞的机制研究
将Balb/C小鼠随机分为正常组、模型组、双黄升白全方组(对照组)、主要组分最佳配伍配比高、中、低剂量组。除正常组外,均采用环磷酰胺腹腔注射造模法形成骨髓抑制模型。检测小鼠外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMNC)数;留取股骨骨髓标本进行HE染色;通过流式细胞仪检测骨髓细胞周期分布:观察粒-单系造血祖细胞集落产率,ELISA检测血清GM-CSF含量,荧光定量PCR检测骨髓GM-CSFmRNA表达,免疫组织化学染色检测骨髓GM-CSF、GM-CSFRα蛋白表达。
结果:
1.黄芪黄精药对主要组分中起主要升白作用的是黄芪多糖、黄精多糖、黄芪皂苷,以上3个组分组合与双黄升白方的升白作用无明显差异;对上述3个组分正交试验拆方结果显示,黄芪多糖、黄精多糖这两组分是黄芪黄精药对中的主要组分,且两者间有协同作用。
2.黄芪多糖与黄精多糖两者比例在10/3~10/5之间时,升高白细胞的作用最为显著;上述结论是黄芪黄精药对主要组分的最佳配伍配比。
3.环磷酰胺腹腔注射法诱导骨髓抑制小鼠模型表现为白细胞减少,持续时间超过10天;骨髓造血组织明显减少,骨髓细胞增殖指数明显降低,粒-单系造血祖细胞集落明显减少。
4.黄芪黄精药对主要组分的最佳配伍配比与双黄升白方作用相似,可升高骨髓抑制小鼠外周血白细胞数、骨髓有核细胞数、促进骨髓有核细胞由G0/G1期进入增殖期,提高粒-单系造血祖细胞集落产率;可显著升高骨髓抑制小鼠的血清GM-CSF水平,显著上调骨髓GM-CSF、GM-CSFRα基因或蛋白的表达。
结论:
1.黄芪多糖、黄精多糖两个组分是黄芪黄精药对中的升白主效应组分,两者比例在10/3~10/5之间组成的组分中药升高白细胞作用显著。
2.黄芪多糖与黄精多糖的最佳配伍配比具有与双黄升白方相似的作用,其机制与促进造血细胞增殖,改善造血微环境有关。