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芥蓝是华南特产蔬菜之一,有较高的营养价值。芥蓝的产品器官绝大部分是菜薹(花薹),目前,绝大部分芥蓝品种的菜薹颜色为绿色,但是,在广东潮汕地区,有一个品种—红脚芥蓝,其自幼苗开始,植株的茎部便是紫红色,这或许是跟栽培环境以及长期的栽培方式有一定关系,但主要是因为跟其它的品种基因型不同。本论文以红脚和中花以及F2代群体为材料,采用相关序列扩增多态性分子标记技术,筛选与菜薹颜色紧密连锁的标记。主要研究内容如下:
一、芥蓝菜薹颜色的遗传分析
由红脚(母本)和中花(父本)杂交得到F1代,F1代自交得到F2代,F2代种植196株。等植株长到商品成熟期时,对薹的颜色进行调查,紫色薹的数量为150株,绿色薹的为46株,所以比例基本符合3:1,说明芥蓝的紫红色薹基因对绿色薹基因是显性。
二、芥蓝基因组DNA的提取
采用改良的CTAB法,提取基因组DNA,所获DNA完整,质量较高,能够满足实验的需要。
三、基因组DNA池的构建
将F2代的植株提取DNA后,测定其浓度。采用分离群体混合分析法在F2代分离群体中挑选完全紫红色薹和完全绿色薹,按浓度将10株完全紫红色薹的DNA等量混合,构建紫色池;将10株完全绿色薹的DNA等量混合,构建绿色池。
四、SRAP标记的带型分析
用153对引物分别对中花和红脚两亲本,紫红色池和绿色池基因组进行PCR扩增。首先以中花和红脚两亲本为模板进行扩增,153对引物中产生差异带的有29对,然后再以紫红色池和绿色池基因为模板继续进行引物筛选,这29对引物中只有引物对me2/em14能反复扩增出差异带。
最后,用基因池中和F2代单株对me2/em14引物对进行扩增验证,结果表明me2/em14600这个标记可能是与芥蓝菜薹颜色连锁的标记。