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目的肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是一种在世界范围内普遍发生的恶性肿瘤,且在致死性癌症中位居第二位。引起肝癌发生的因素有很多,但HBV感染是诱发肝癌的最常见的原因。目前有研究发现miRNA在HBV相关的肝癌发生过程中发挥着重要的作用,但其具体作用机制尚未阐明。miRNA是一类保守的短非编码RNA,通过与靶基因的3’UTR结合从而影响生理及病理进程。本实验室前期工作中,在3对肝癌组织的Solexa测序中发现miR-3928v表达峰度较高,自由能较低,所以本实验拟在此基础上,研究miR-3928v对肝癌细胞恶性行为的影响,并确定调控miR-3928v表达的上游机制,同时检测HBV对肝癌细胞表型的影响是否与miR-3928v相关,从而阐明miR-3928v在HBV病毒感染相关的肝癌发生发展中可能的分子机制。方法首先用Real-time PCR方法检测miR-3928v在肝癌组织、血清及HBV阳性细胞中的表达水平以验证实验室前期工作中Solexa测序结果。随后在两种人肝癌阴性细胞系Huh7和HepG2细胞中过表达miR-3928v,在人肝癌阳性细胞系封闭miR-3928v,利用MTT实验,平板克隆,Transwell迁移及侵袭实验检测其对肝癌细胞的生长、迁移和侵袭的影响。之后利用流式细胞术检测miR-3928v对细胞凋亡及细胞周期的影响进一步确定miR-3928v对肝癌细胞生长活性影响的机制。为了进一步确定miR-3928v的功能,裸鼠体内成瘤实验确定miR-3928v体内对肝癌生长的影响。其次,检测了HBV/HBx对肝癌细胞表型的影响并设计了挽救实验,进一步验证miR-3928v在HBV诱发的肝癌的发生发展中发挥了重要作用。最后,运用PromotorScan预测并克隆miR-3928v的启动子,筛选了参与调控的转录因子,通过双荧光素酶报告实验确定miR-3928v启动子发挥作用的核心区域,并通过Western blot和对肝癌组织的免疫组化染色检测HBV/HBx诱导的miR-3928v过程中EGR1的表达水平,通过免疫荧光观察HBV/HBx对EGR1入核的影响。结果miR-3928v在肝癌组织、血清及HBV阳性的肝癌细胞中表达明显升高。过表达miR-3928v通过抑制细胞凋亡、促进细胞周期进程从而促进肝癌细胞(HepG2.2.15、HepG2、Huh7)的增殖,同样,miR-3928v可促进肝癌细胞迁移和侵袭能力。在肝癌阴性细胞系中过表达HBV1.3copy及HBx促进细胞活性、克隆形成、迁移及侵袭能力,并且这种促癌作用可被miR-3928v封闭后挽救。PromotorScan预测miR-3928v的启动子并克隆了启动子片段,HBV/HBx诱导的转录因子EGR1结合miR-3928v启动子并激活了miR-3928v的表达从而促进肝癌细胞的恶性行为。结论在HBV相关的肝细胞癌中,HBV/HBx能够诱导miR-3928v表达升高,在肝癌细胞中过表达miR-3928v可以促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭,起到癌基因的作用。进一步机制研究发现EGR1直接与miR-3928v启动子结合促进其表达,从而促进肝癌细胞恶性行为,并且HBV对miR-3928v的诱导作用是通过促进EGR1入核增加引起的。通过阐明miR-3928v在肝癌中的具体作用机制及其上游机制的研究有助于我们对HBV相关肝癌的发生发展机制的深入理解,同时也可能为开发HBV相关肝癌的诊断和治疗手段提供新的实验基础。