隔药饼灸调控PI3K/AKT通路稳定兔动脉粥样硬化易损斑块机制的研究

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目的:观察隔药饼灸对动脉粥样硬化易损斑块兔(vulnerable atherosclerotic plaque, VAP)腹主动脉P13K及AKT表达的影响,初步探讨隔药饼灸抑制PI3K/AKT通路转导从而稳定VAP的作用机理。方法:新西兰大白兔60只,随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组及药物组,每组均12只。予高脂饲喂加球囊损伤腹主动脉方法,野生型p53基因的转染,中国斑点蝰蛇毒和组胺药物触发,制备VAP兔模型,同时予不同的干预措施。第12周后取动脉血测TC、 TG、 LDL-C、 HDL-C、 Apo-A、 Apo-B含量,计算HDL-C/LDL-C值;HE染色显微镜观察病理及斑块形态,测量腹主动脉内膜、内膜中膜厚度(IMT);透射电镜观察兔腹主动脉内皮细胞超微结构;免疫组化法检测PI3K、AKT及TNF-α的灰度值,观察三者抗原免疫活性;实时荧光定量PCR检测PI3KmRNA、 AKTmRNA及TNF-α mRNA的表达。结果:1.血脂含量:与模型组比较,各治疗组血清TC、 TG、LDL-C、Apo-B含量均显著降低(P<0.05或P<0.01),HDL-C、Apo-A含量均显著升高(P<0.05或P<0.01)。2.AS易损斑块超微结构:(1)模型组兔主动脉内皮及内皮下层病变严重,内含大量脂质和泡沫样变细胞,病灶中心部细胞发生坏死、崩解、脂质析出;内弹力膜及中膜的弹力纤维发生断裂崩解,呈虫蚀样改变;大量平滑肌细胞由中膜向内膜迁移并增生,细胞排列紊乱,并有大量泡沫细胞及纤维结缔组织形成,表明模型成功;(2)与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和药物组兔主动脉内皮结构都较相似,大多形态正常,内弹力膜连续,厚薄较均匀,平滑肌细胞基本正常,偶可见线粒体水肿、空泡样改变及少量脂滴,表明三种治法均能有效保护AS易损斑块兔主动脉内皮细胞。3.AS易损斑块内膜和内膜中膜厚度:(1)与空白组比较,模型组兔主动脉内膜厚度、内膜中膜厚度明显增高(P<0.01),表明模型成功;(2)与模型组比较,直接灸组、隔药饼灸组和药物组兔主动脉内膜厚度、内膜中膜厚度均显著降低(P<0.01),差异具有统计学意义,表明灸法和药物均能阻止内膜增生的发展;(3)与直接灸组比较,隔药饼灸组和药物组兔主动脉内膜厚度显著降低(P<0.01),内膜中膜厚度降低(P<0.05),差异具有统计学意义。4.抗原活性显示:隔药饼灸组和药物组均能升高AS易损斑块兔炎症因子灰度值的表达,且效果优于直接灸组。5. RT-qPCR显示:直接灸组和药物组的PI3KmRNA表达明显下降(P<0.05),隔药饼灸组PI3KmRNA表达无明显下降(P>0.05);直接灸组、隔药饼灸组AKTmRNA、 TNF-α mRNA表达明显下降(P<0.01);药物组AKTmRNA、 TNF-a mRNA表达下降,但不明显(P>0.05)。结论:1.隔药饼灸能有效降低VAP兔血中TC、TG含量,且能降低血中LDL-C和Apo-B值含量,升高H.DL和Apo-A含量,提示隔药饼灸对脂质及脂蛋白的代谢具有良好的调整作用。2.隔药饼灸对VAP兔腹主动脉内皮细胞有一定的保护作用。3.隔药饼灸能抑制腹主动脉AKT活性,抑制腹主动脉AKTmRNA表达,提示隔药饼灸是通过抑制AKT表达从而稳定VAP。
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