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目的：本实验旨在探讨汉防已甲素(TET)在逆转人慢性粒细胞白血病急性红白血病变细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02细胞耐药与耐药相关性可溶性钙结合蛋白(sorcin)及其基因、细胞周期依赖性激酶抑制因子(p21)、P糖蛋白(P-gp)及其基因之间的关系,探讨药物的可能机制,为TET的临床应用提供新的理论基础。
方法：通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选出所需浓度TET,与K562/A02细胞株孵育培养48/72小时后,通过MTT比色法检测TET对DNR细胞毒性的影响；通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞sorcin基因表达的变化,蛋白质斑迹法方法检测细胞sorcin蛋白表达的变化；通过Western blot方法检测细胞p21蛋白表达的变化,通过RT-PCR方法检测细胞多药耐药基因mdrl的mRNA表达的变化,流式细胞术(FCM)检测细胞P-gp的表达。
结果：(1)MTT法筛选结果:TET单药48小时对K562及K562/A02细胞株的IC50均大于4mg/L。(2)TET对DNR细胞毒性的影响：在所选浓度范围内,TET不增强DNR对K562的细胞毒作用,可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用(48小时TET浓度为0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L时DNR的IC50分别为11.34±0.86mg/L,5.72±0.42mg/L,3.68±0.42mg/L和2.56±0.24mg/L,p<0.05;72小时TET浓度为0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L时DNR的IC50分别为8.01±0.79mg/L,3.91±0.55mg/L,2.65±0.26mg/L和2.00±0.06mg/L,p<0.05)。(3)细胞sorcin基因表达的变化:K562/A02细胞中sorcin基因高表达,48小时时随着TET浓度的增加sorcin基因的表达不断变化(TET浓度为0.5mg/L时增强,1.0mg/L、2.0mg/L时减弱,p<0.05;72小时时随着TET浓度的增加sorcin基因的表达也不断变化(TET浓度为1.0mg/L时增强,0.5mg/L、2.0mg/L时减弱,p<0.05)。(4)细胞sorcin蛋白表达的变化:K562细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,48小时时随着TET浓度的增加不断变化(TET浓度为0.5mg/L时增强,1.0mg/L、2.0mg/L时减弱,p<0.05;72小时时随着TET浓度的增加sorcin蛋白的表达也不断变化(TET浓度为1.0mg/L时增强,0.5mg/L、2.0mg/L时减弱,p<0.05)。(5)细胞p21蛋白表达的变化：在所选浓度范围内,p21的表达随着TET浓度的增加逐渐增强(p<0.05)。(6)细胞mdrl基因表达的变化:K562细胞中mdrl几乎不表达,K562/A02细胞中mdrl基因高表达,随着TET浓度的增加mdrl基因的表达逐渐减弱(p<0.05)。(7)细胞P-gp蛋白的表达变化:K562细胞中P-gp表达极低,K562/A02细胞中P-gp高表达,P-gp的表达随着TET浓度的增加逐渐减弱p<0.05)。
结论：TET对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,TET可能通过调整sorcin基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,并可能通过上调p21蛋白的表达,下调mdrl及P-gp的表达参与逆转K562/A02的耐药性,对p21蛋白、mdrl、P-gp的影响均呈浓度依赖性。