力竭运动与钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及Hes1/Jagged1/Pax7含量的影响

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实验目的研究力竭运动与钝挫伤对大鼠骨骼肌卫星细胞体外增殖及Hes1、Jagged1、Pax7含量的影响。实验方法将42只五周龄雄性SD大鼠随机分为7组,每组6只:安静对照组(control, C)、力竭运动即刻组(Exhaustive, EO)、力竭后24h组(E24)、力竭后48h组(E48)、钝挫伤即刻组(Contusion, DO)、钝挫伤24h组(D24)、钝挫伤48h组(D48)。力竭运动是进行一次力竭性下坡跑运动均达到力竭状态。安静对照组、各力竭运动组及钝挫伤组分别在安静状态、力竭后、钝挫伤后不同的时间点进行处死、取血。处死时用20%的乌拉坦麻醉,取左侧腓肠肌,将取下组织一分为二,一份立刻进行细胞培养实验,另一份先用液氮保存,后转-80℃冰箱保存,ELISA测定血清及骨骼肌中Hes1、Jaggedl、Pax 7含量的变化。另取新生鼠一只,取其左侧腓肠肌进行细胞培养实验。实验结果:(1)肌卫星细胞培养结果:成功分离消化了肌组织,在体外获得高纯度具有成肌能力-的肌卫星细胞;培养初期阶段,新生鼠的肌卫星细胞增殖速度最快,含量最高,培养第一天,培养皿中便可见少量纺锤形的单核细胞出现,其他各组未见明显的细胞增殖现象。新生鼠第四天大量增殖,到第五天卫星细胞相互融合形成多核的肌管;而其他各组在前期则增殖相对较慢,但第五天开始大量增殖,第七天达到高峰,基本布满大部分培养皿,之后每组的增殖速度均开始下降;安静对照组肌卫星细胞增殖最慢,含量最少,未见明显的增殖现象;力竭组与钝挫伤组介于新生鼠和安静组之间,并且钝挫伤组卫星细胞含量相对较多。(2) Elisa结果:力竭运动组、钝挫伤组骨骼肌和血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与安静对照组比较,显著增高,具有统计学意义(P<0.05);力竭运动各组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量组间比较,E0略低于E24组与E48组,无显著差异,E24组与E48组无显著差异,不具有统计学意义;钝挫伤各组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7含量组间比较,即刻组略低于24h组与48h组,无显著差异,D24组与D48组无显著差异,不具统计学意义;钝挫伤组骨骼肌和血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与力竭运动组比较,钝挫伤组略高于力竭运动组,不具统计学意义。结论:(1)安静对照组未见明显的卫星细胞增殖。力竭运动和钝挫伤均可以激活卫星细胞,使其增殖分化,且钝挫伤对卫星细胞的刺激更强烈,增殖数量略大于力竭组。(2)力竭运动组与钝挫伤组骨骼肌、血清中Hes1、Jagged1、Pax7的含量与安静对照组相比均显著增高,力竭组比钝挫伤组略低。力竭运动与钝挫伤均可以引起大鼠骨骼肌Hes1、Jagged1、Pax7含量升高,其可能在骨骼肌卫星细胞激活及骨骼肌损伤修复中起正调节作用。
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