腺苷是一种重要的内源性核苷,是影响机体核酸及能量代谢的关键物质。研究表明,腺苷可作为多种肿瘤的生物标志物,其浓度水平与肿瘤的发生与转归过程存在紧密联系,尤其在肺癌患者的血浆中往往能检测到高浓度的腺苷。因此,腺苷的高灵敏度检测对于肿瘤的早期筛查与诊断具有重要意义。本研究结合了腺苷特异性的核酸适配体以及基于核酸外切酶III的循环信号扩增技术,提出了一种低成本、高灵敏度的免标记比色传感策略用于腺苷的检测。本方案使用了两个无标记的发卡状核酸探针HP1及HP2,其中HP1包含了腺苷适配体,而HP2则包含富鸟苷酸序列用于形成G四联体结构。当腺苷存在时,腺苷能与HP1的适配体部分特异性结合,形成腺苷-HP1复合物,改变HP1构象,暴露出HP1的3’末端单链。这段单链进而与发卡状HP2杂交,形成腺苷-HP1-HP2三元复合物。此复合物被核酸外切酶III降解后,一方面,腺苷-HP1复合物被释放,重新结合剩余的HP2,实现循环信号放大过程;另一方面,降解后残留的HP2片段暴露出的富鸟苷酸序列形成G四联体,并催化四甲基联苯胺显色,可通过肉眼观察颜色变化或测定溶液吸光度实现定量。若腺苷不存在,则发卡结构的HP1无法自行打开,从而无法引发下游反应,最终导致较低的吸光度。本方案中,腺苷与适配体的特异性结合保证了方法专属性,而基于核酸外切酶III的循环信号放大反应则提高了灵敏度。本方案的检测限为17 nmol L-1,线性范围为50 nmol L-1-6μmol L-1,且能应用于血浆样品中腺苷的定量检测。