【摘 要】
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上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）是恶性肿瘤发生迁移侵袭的重要因素之一,研究青蒿琥酯（Artesunate,ART）对结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）HCT-8细胞的活性、集落形成、迁移侵袭和EMT的影响,以及探讨AKT/Snail信号通路在HCT-8细胞EMT中的重要作用。本实验研究以结直肠癌HCT-8细胞为研
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上皮-间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）是恶性肿瘤发生迁移侵袭的重要因素之一,研究青蒿琥酯（Artesunate,ART）对结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）HCT-8细胞的活性、集落形成、迁移侵袭和EMT的影响,以及探讨AKT/Snail信号通路在HCT-8细胞EMT中的重要作用。本实验研究以结直肠癌HCT-8细胞为研究对象,首先采用3-（4-5-二甲基噻唑-2-基）-2,5-二苯基四唑溴化法（MTT法）检测不同浓度ART组对HCT-8细胞活性的影响,采用集落形成实验检测HCT-8细胞集落形成的能力,分别采用伤口愈合实验和Transwell实验,检测ART对结直肠癌HCT-8细胞迁移和侵袭能力的影响。采用免疫细胞化学法和免疫荧光双重染色法检测不同浓度ART对肿瘤细胞HCT-8中EMT相关蛋白波形蛋白（Vimentin,Vim）、E-钙粘蛋白（E-cadherin,E-cad）表达情况的影响。采用蛋白质印迹法研究检测ART对HCT-8细胞中EMT相关标志物蛋白N-钙粘蛋白（N-cadherin,N-cad）、Vim和E-cad的蛋白表达情况的影响以及对AKT/Snail信号途径中相关蛋白Akt1、p-Akt1和Snail1表达的影响。结果提示,在体外培养人结直肠癌细胞株HCT-8,计算不同浓度的ART作用于HCT-8细胞的增殖抑制率,并绘制出量效曲线,得出ART对HCT-8细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值为（15.63±1.95）μM,由此将实验药物组分为四组:⑴对照组（0μM）、⑵低浓度组（2μM）、⑶中浓度组（10μM）、⑷高浓度组（50μM）。与对照组相比,ART能抑制HCT-8细胞的集落形成（P<0.05）。伤口愈合实验检测结果显示ART可显著抑制结直肠癌HCT-8细胞的迁移（P<0.05）。Transwell实验结果表明ART抑制HCT-8细胞的侵袭能力（P<0.05）。免疫细胞化学法观察到在经过不同浓度ART对HCT-8细胞处理后,EMT相关蛋白E-cad表达显著上调（P<0.01）,Vim蛋白表达显著下调（P<0.01）,免疫荧光双重染色法结果提示ART对EMT相关蛋白经ART处理后可增加E-cad表达,降低Vim的表达（P<0.01）。ART处理48h后,Western blot检测相关蛋白表达情况得出与上述实验结果一致,E-cad蛋白表达上调,N-cad蛋白、Vim蛋白的表达降低（P<0.01）。使用通路抑制剂后,伤口愈合实验结果显示,与对照组相比,ART组,ART联合LY294002组伤口迁移率降低（P<0.05）。Western blot结果提示AKT/Snail信号通路相关蛋白p-Akt1和Snail1的表达水平显著降低（P<0.01）,EMT相关标志蛋白E-cad的表达上调、N-cad、Vim的表达下调（P<0.05）。综上所述,ART能明显抑制HCT-8细胞活性、克隆形成、迁移和侵袭,并抑制EMT进程,可能与抑制AKT/Snail通路活化有关。ART可能是一种潜在的治疗结直肠癌的临床抗癌药物。
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