【摘 要】
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随着研究的深入,枯草芽孢杆菌作为益生菌被广泛的用于水产养殖业用来调控水质、降低饲料系数和增强免疫力。目前,多种多样的水产益生菌被分离鉴定,但是很少菌株被认证并用于生产
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随着研究的深入,枯草芽孢杆菌作为益生菌被广泛的用于水产养殖业用来调控水质、降低饲料系数和增强免疫力。目前,多种多样的水产益生菌被分离鉴定,但是很少菌株被认证并用于生产实践。本研究的目的在于寻找新型高效的水产益生菌菌种。为此,我们从草鱼肠道中分离到11株枯草芽孢杆菌,采用生理生化试验分析以及gyrB、rpoB和phoR三个分子标记基因测序分析进行分类鉴定,将其分为四类,每类选取一个代表菌株作为研究对象,分别为GC-5、GC-6、GC-21和GC-22。为了研究所分离的菌株是否具有作为饲料添加剂益生菌的重要特性,我们进行了急性和慢性毒性试验、病原菌抑制试验、抗生素最低抑制浓度试验、芽孢的形成效率试验、生物膜的产生试验、芽孢对肠道内环境的耐受试验(高浓度胆汁和低pH)和高温耐受试验。为了探究芽孢和细菌菌体对肠上皮细胞的粘附作用,我们用人结肠腺癌细胞系Caco-2进行粘附试验,并在扫描电子显微镜下成像。此外,在以上研究的基础上,为了探究所分离的枯草芽孢杆菌对重要水产养殖鱼类(草鱼)是否具有提高免疫力的作用,我们选取了GC-21和GC-22这2株相对优势的菌株进行体内实验,即将GC-21和GC-22培养的芽孢喷洒在饲料表面,然后投喂一定规格的幼鱼,之后对某些重要的免疫基因在肠组织中的表达进行检测。我们的实验表明,所分离的枯草芽孢杆菌菌株具有作为益生菌的基本特性;其芽孢和菌体都能够粘附于Caco-2细胞上并与后者的细胞质基质直接作用,这是芽孢在肠道内定殖和繁殖进而发挥益生作用的基础。此外,活体实验结果表明,菌株GC-21和GC-22能够上调抗炎细胞因子(IL-10和TGF-β)基因的表达,并使促炎细胞因子(IL-1β和TNF-α)基因的表达下调,从而有益于消除草鱼肠道炎症进而提高草鱼的免疫能力。以上实验结果表明,所分离的枯草芽孢杆菌中的一种或多种具有作为新型水产益生菌的潜能。
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