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第一部分干扰GINS2表达对HL60细胞增殖和凋亡的影响目的：探讨干扰GINS2基因表达后对人早幼粒细胞白血病细胞株HL60增殖和凋亡的影响及其机制。方法： RT-PCR分别检测GINS2基因在3株白血病细胞株HL60、U937、THP-1中的表达量。设计并合成针对GINS2基因的靶向干扰序列，稳定转染高表达该基因的HL60细胞，荧光显微镜观察绿色荧光蛋白的表达情况；RT-PCR和Western blot分别检测各组细胞转染后GINS2的mRNA及蛋白水平； MTT法检测细胞的增殖和凋亡情况；流式细胞术分析细胞的凋亡率；Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果：在3株白血病细胞株中，GINS2的表达量由低到高依次是：THP-1，U937，HL60。干扰质粒转染HL60细胞后，与阴性对照组及未处理组相比，干扰组GINS2的mRNA及蛋白水平均显著降低，且细胞的增殖能力明显受抑。同时，凋亡相关蛋白Bax表达水平显著增高而Bcl2显著降低。结论：下调GINS2基因表达后，可通过上调Bax表达，下调Bcl2表达来抑制HL60细胞增殖并促进其凋亡。第二部分干扰GINS2表达对HL60细胞周期调控因子的变化及机制目的：观察下调GINS2基因的表达后对人白血病细胞株HL60周期调控因子的变化并探讨其机制。方法：脂质体介导并稳定转染干扰质粒的细胞为干扰组，转染阴性对照质粒的细胞为阴性对照组，只加入脂质体的细胞为空白对照组，未转染的HL60细胞为未处理组。采用集落形成实验测定细胞的增殖水平；流式细胞术分析各组细胞周期；Western blot检测CDK1、CyclinB1等周期调控蛋白的变化；同时采用RT-PCR检测ATM，CHK2,P53等周期调控因子mRNA水平的表达；Western blot检测其蛋白水平的表达情况。结果：和其他3组相比，干扰组细胞G2/M期细胞数明显增加且DNA合成受阻，增殖减慢。与G2/M期相关周期调控蛋白CDK1，cyclinB1的表达随时间变化而明显降低。RT-PCR和western blot均显示和其他三组相比，干扰组细胞ATM,CHK2,P53转录水平和翻译水平显著上调。结论：下调GINS2表达后可抑制HL60细胞DNA复制并影响其G2/M期进程，机制可能与ATM，CHK2,P53等基因有关。第三部分携人GINS2基因重组腺病毒载体的构建及其对HL60细增殖和凋亡的影响目的：使用AdEasy系统构建携带GINS2基因的重组腺病毒载体并进行鉴定，观察上调GINS2表达对HL60细胞增殖及凋亡的影响。方法：以pcDNA3.1-GINS2质粒作为模版，RT-PCR法扩增GINS2基因编码序列全长并克隆入穿梭载体pAdTrace-TO4，经转化、酶切和测序正确后，将产生的重组质粒pAdT-GINS2转化入pAdEasy-1-BJ5183感受态进行同源重组，得到重组子pAdE-GINS2。后将其转染HEK293细胞进行包装，行PCR和荧光显微镜鉴定重组腺病毒Ad-GINS2。待扩增测定滴度后感染人HL60细胞，MTT法检测重组腺病毒感染后HL60细胞的生长情况，集落形成实验测定细胞的增殖情况，流式细胞术检测凋亡细胞个数，PCR和western blot法分别检测凋亡蛋白Bax，Bcl2的变化情况。结果：酶切、PCR、测序结果显示GINS2基因克隆入穿梭质粒，并得到重组腺病毒Ad-GINS2；PCR法和荧光显微镜显示包装成功；经三轮高效扩增病毒后病毒滴度达1.35×1012IU/ml，感染HL60细胞后，western blot可检测到GINS2的表达，MTT和集落形成实验结果均表明GINS2过表达后能促进细胞增殖，流式细胞术显示病毒感染细胞后凋亡率明显降低， Western blot显示凋亡蛋白Bax显著降低而Bcl2显著升高。结论：成功构建包含GINS2基因的重组腺病毒载体，可通过上调Bcl2表达而抑制Bax表达促进HL60细胞增殖，为明确该基因在急性髓细胞白血病发生和发展中的作用机制奠定了一定基础。