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目的:对浙江省ICU患者呼吸道和肠道样本分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌进行横断面监测,同时对ICU筛查中首次发现的携带blaOXA-232肺炎克雷伯菌进行表型和分子特征分析,评估携带blaOXA-48-like耐药菌株流行的可能性。方法:收集浙江省2017年7月到2018年8月9家三级甲等医院ICU患者痰和粪便样本,接种于培养基后采用VITEK-2 Compact细菌鉴定仪和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)鉴定并筛选出肺炎克雷伯菌,K-B纸片法筛选出碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌。采用拉丝试验检测菌株高黏液表型;微量肉汤稀释法测定常见抗生素敏感性;PCR检测β-内酰胺酶耐药基因(blaKPC,blaNDM,blaVIM,blaIMP,blaOXA-48-like,blaCTX-M,blaTEM,blaSHV);多位点序列分型(MLST)和脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行同源性分析;接合试验验证编码blaOXA-232遗传组件水平传播的可移动性;S1-PFGE鉴定blaOXA-232编码元件的质粒谱特征;全基因组测序分析携带blaOXA-232肺炎克雷伯菌的相关遗传特性;大蜡螟感染模型和中性粒细胞杀菌试验分析耐药菌株的毒力和抗杀伤能力。结果:一共有来自9家医院的222名ICU患者参与了此项研究,共分离到149株肺炎克雷伯菌,其中65株对碳青霉烯类表现为耐药表型,碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌分离率达到了 43.6%。拉丝试验结果显示只有2株CRKP有高黏液表型。药敏结果显示,除多粘菌素B,替加环素和头孢他啶/阿维巴坦,大部分CRKP菌株对多种抗生素具有抗性,其中10株产blaOXA-232耐药菌株对厄他培南有抗性但对美罗培南和亚胺培南敏感。PCR结果显示,65株CRKP中54株携带blaKPc-2,10株产laoOXA-232,1株携带blaNDM-5,而超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因blac-rx-M-65检出率为55.4%。PFGE显示同家医院内存在克隆传播现象,MLST分析显示ST11(78%,43/55)是产blaKPc/NDM耐药菌株最流行的分型,而产blaOXA-232耐药菌株均为ST15。接合试验表明blaOXA-232基因位于非接合质粒上,而S1-PFGE则表明产blaOXA-232菌株含有至少3个或3个以上质粒,其中最常见的质粒大小是约130kb,175kb和78kb。全基因组测序证实产blaOXA-232肺炎克雷伯菌的基因组大小均在5.7～5.8Mb之间,基于原始测序结果的菌株配对单核苷酸多态性分析显示,它们的核心基因组仅存在少数单核苷酸多态性(n≤15)不同。大蜡螟试验表明分离自痰液的产blaKPC肺炎克雷伯菌毒力总体上高于分离自粪便的产blaKPC菌株毒力;而产balOXA-232肺炎克雷伯菌虽然拥有pLVPK毒力质粒,但同等菌液浓度的注射剂量下,产blaOXA-232肺炎克雷伯菌引起的大蜡螟幼虫死亡率远低于产blaKPC肺炎克雷伯菌造成的死亡率,中性粒细胞杀菌试验结果亦显示其并没有高毒力特性。结论:浙江省内部分ICU分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌呈高流行状态,且呼吸道分离的携带blaKPC/NDM肺炎克雷伯菌毒力整体上高于肠道分离的携带blaKPC/NDM肺炎克雷伯菌,同时携带blfaOXA-232肺炎克雷伯菌首次在浙江三甲医院ICU的出现和小范围流行,表明了blaOXA-232存在克隆传播的潜在可能,提示临床和实验室应加强对D类β-内酰胺酶的监测以阻止新型耐药细菌在中国地区的流行和传播。