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实验背景及目的乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,好发于40-60岁之间的女性,近年来,随着人们生活方式及饮食习惯的改变,乳腺癌发病率呈逐年上升趋势,并且发病年龄逐渐呈低龄化改变。乳腺癌的发生是一个多因素、多突变累积的过程,至今发病机制尚未清楚。关于乳腺癌发生、发展、转移中相关蛋白过度表达以及激活一直是该领域研究的热点。Pak 1 (p21-activated kinase-1, p21激活激酶1)基因定位于人类染色体11q13.5-q14区,研究发现该基因的异常与乳腺癌和白血病等恶性肿瘤的发生发展密切相关。并对乳腺肿瘤细胞发生、存活、有丝分裂、细胞骨架再生重组、细胞迁移、以及激素非依赖性进展起重要作用。本实验采用实时荧光定量RT-PCR及免疫组化方法检测Pak1基因mRNA丰度及在乳腺癌组织中蛋白质含量。结合患者临床病理学资料,进一步了解其在肿瘤发生、发展中的分子机制及临床病理学意义。实验方法采用实时荧光定量PCR的方法,以SYBR Green I为荧光染料,GAPDH作为内参基因,相对定量出35例乳腺癌和10例乳腺良性病变、15例远癌正常小叶组织中Pak1基因mRNA的表达量,在转录水平分析Pak1的表达量与ER、PR、CerbB-2及腋窝淋巴结转移情况的相关性。另采用免疫组化Super Pic Ture法检测35例乳腺癌和15例远癌正常小叶组织标本中Pak1蛋白的表达,并在蛋白水平进行Pak1的表达与ER、PR、CerbB-2及淋巴结转移情况相关性分析。实验结果Pak1 mRNA和蛋白的相对表达量分别为：(1) Pak1mRNA在35例乳腺癌中相对表达量为4.76±0.11,在10例乳腺良性病变中相对表达量为2.66±0.10,15例正常小叶组织中相对表达量为0.94±0.06,。乳腺癌Pak1mRNA表达量明显高于乳腺良性病变,乳腺良性病变组织高于正常小叶组织,各组间的差异有显著性(P＜0.003)；(2)雌激素受体阳性的乳腺癌组织中Pak1的相对表达量为5.04±0.69,在雌激素受体阴性的乳腺癌组织中为4.59±0.57,两者间有显著差异(P=0.038)；(3)免疫组化染色结果中Pak1在雌激素受体阳性的乳腺癌组织中过度表达的阳性率为90.48%(19／21),雌激素受体阴性的乳腺癌组织中过度表达的阳性率为57.14%(8／14),两者间有显著差异。(P<0.05)；孕激素阳性的乳腺癌组织中过度表达的阳性率为86.96%(20／22),孕激素受体阴性的乳腺癌组织中过度表达的阳性率为53.85%(7／13),两者间有显著差异。(P＜0.05); (4)Pak1mRNA和蛋白表达与乳腺癌患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况及CerbB-2表达水平未见相关性(P>0.05)。实验结论Pak1作为癌基因参与了乳腺癌发生、发展及预后过程,Pak1的高表达是乳腺癌的普遍现象,并且与雌激素受体水平相关,也可能与孕激素受体相关,而与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移情况、CerbB-2关系不密切。并在肿瘤细胞免疫逃逸、运动、血管发生和基因调节中发挥重要作用。因此,Pak1可能组成了肿瘤演进过程中信号传导的关键节点。实施对Pak1信号传导的干预必将诱导乳腺癌细胞凋亡、抑制增殖和抑制肿瘤血管生成。定量检测其水平,对乳腺癌的早期诊断、预后判断有一定价值。