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绵羊痒螨(Psoroptes ovis)寄生于羊、牛、兔等家养动物和麋鹿等野生动物皮肤表面导致以皮肤炎症、结痂、剧痒、消瘦和脱毛为主要临床特征的一种慢性、传染性外寄生虫病,给动物养殖业造成巨大经济损失,同时威胁野生动物的生存。炎症反应的触发主要依赖于固有免疫系统中Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)对病原微生物的识别,从而激活细胞内相关信号转导通路,最终调节炎症因子、细胞因子和共刺激分子的表达和释放来抵御病原的感染。目前,尚未见绵羊痒螨感染宿主后所激活的TLRs及其信号通路的相关研究。因此,本研究拟从在体和离体模型去探究绵羊痒螨对新西兰兔TLRs及其信号通路相关分子的影响,以期为后续深入研究绵羊痒螨感染对宿主固有免疫系统的影响提供基础资料。1痒螨病患兔耳部皮肤及外周血中TLRs转录水平的表达以健康新西兰兔为对照,采用荧光定量PCR检测自然感染绵羊痒螨的新西兰兔TLRs的转录水平。结果显示:与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔耳部皮肤中,TLR4、5 mRNA表达量极显著上调(P<0.01),TLR8、10、11、12 mRNA表达量显著上调(P<0.05),而TLR1、6、9 mRNA表达量上调,但差异不显著(P>0.05);TLR3 mRNA表达量极显著下降(P<0.01),TLR2表达量下降,但差异不显著(P>0.05)。与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔外周血中,TLR1、2、4、10、12 mRNA表达量呈极显著上调(P<0.01),TLR 9 mRNA表达量显著上调(P>0.05);但TLR 6表达量下调,不具统计学差异(P<0.05),未检测到TLR3、5、8和11。上述结果表明,绵羊痒螨感染新西兰兔后可改变宿主皮肤和外周血各类TLRs的转录水平。2痒螨病患兔耳部皮肤及外周血中TLRs信号通路相关分子的表达以健康新西兰兔为对照,采用荧光定量PCR检测自然感染绵羊痒螨的新西兰兔的TLRs信号通路相关分子的转录水平。结果显示:与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔耳部皮肤中,TRIF、IL-8的mRNA表达量呈极显著上升(P<0.01),p38、ERK1/2和NF-κB mRNA表达量均表现出上升,不具有统计学差异(P>0.05),而MyD88 mRNA表达量下降,亦不具统计学差异(P>0.05)。与健康新西兰兔相比,感染痒螨的新西兰兔外周血中,p38、ERK1/2和NF-κB mRNA表达量均呈极显著上升(P<0.01),IL-8 mRNA表达量上升(P<0.05),且TRIF、MyD88 mRNA表达量上升(P>0.05)。上述结果表明,痒螨感染新西兰兔后可改变宿主皮肤与外周血TLRs信号通路相关分子的表达。3绵羊痒螨排泄分泌抗原对新西兰兔原代角质形成细胞TLRs及其信号通路相关分子的影响以新西兰兔原代角质形成细胞作为离体模型,采用荧光定量PCR检测绵羊痒螨排泄分泌抗原对该细胞TLRs及其信号通路关键分子的影响。结果表明:与未刺激组相比,经痒螨抗原刺激后的原代角质形成细胞TLR1、2、3、4、6、12 mRNA表达量呈极显著上升(P<0.01),TLR5、8、9表达量上升,不具统计学差异(P>0.05),而TLR10和TLR11未检测到有效表达。痒螨抗原刺激后的原代角质形成细胞较未刺激组细胞的TLRs信号通路中的关键下游分子MyD88、TRIF、p38、ERK1/2、NF-κB、IL-8 mRNA表达量均呈极显著上升(P<0.01)。上述结果表明,绵羊痒螨排泄分泌抗原可改变新西兰兔原代角质形成细胞的TLRs及其信号通路关键分子的表达。