肝素是由糖醛酸和氨基葡萄糖以1→4糖苷键连接的二糖重复单元组成的线性多糖,其中糖醛酸残基包括L-艾杜糖醛酸和D-葡萄糖醛酸,氨基葡萄糖为D-葡萄糖胺。肝素具有许多生理活性,参与细胞分化、细胞迁移、免疫等重要生理过程。由于硫酸化修饰的差异,使肝素成份非常复杂,组成成份的定量分析对于了解其生物活性、质量控制具有重要意义。低分子量肝素作为一种新型抗凝血药物被广泛用于预防和治疗术后血栓栓塞性疾病。低分子量肝素在碱性条件下发生p-消除反应降解引起特殊化学键的断裂生成1,6-成环衍生物,因此低分子量肝素与普通肝素相比结构更为复杂。然而,对于低分子量肝素类药物而言,低分子量肝素精细结构的分析研究是一项具有挑战性的工作。本论文主要从以下分为三部分研究低分子量肝素的精细结构,其具体内容和结果如下：1、本部分建立了一种新的基于毛细管电泳法测定低分子量肝素精细结构的分析方法。低分子量肝素在肝素酶Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ完全酶解的条件下可以得到相应的低聚糖。在120 mmol/L甲酸(pH=3.4)缓冲液条件下,这些低聚糖可以得到非常有效的分离。在缓冲液中添加1%(w/v) PEG (10000)和2 mmol/L CaCl2可以有效提高核质比非常接近低聚糖的分离度。在最佳的缓冲体系中,几乎所有低聚糖都能达到基线分离和定量测定。低聚糖的电解迁移率与其核质比呈线性关系,这有利于利用保留时间指认出色谱图上各个色谱峰。该方法重复性好,定量准确。毛细管电泳法和离子交换色谱进行比较,毛细管电泳分析低分子量肝素精细结构分辨率更高。2、本部分建立了用于分离并定量测定低分子量肝素中不同糖链长度的各个组份分布比例的体积排阻色谱方法。系统考察了流动相的组成、离子强度和pH值、流速、柱温等因素对分离的影响,确定的最佳分离条件为：两根色谱柱TSK-GEL G2000SWxl (7.8 mm×300 mm)串联,流动相100 mmol/L NH4Ac(pH=7.0),流速0.5 mL/min,柱温35℃,进样量5μL,样品浓度10 mg/mL。对方法的重现性和稳定性进行了验证,一天之内和天与天之间低分子硫酸化多糖各组成成份迁移时间和峰高的相对标准偏差分别0.1%-1.5%和0.2%-6.9%。在最佳的分离条件下,可以将低分子量肝素样品中不同糖链长度的各个组份分离并对各个组份的分布进行了定量分析。用该方法对美国药标准品(USP)、商品和杭州九源基因有限公司制备的低分子量肝素糖链长度分布进行了定量对比。证明该方法可用于低分子量肝素类药物的组成成份的质量控制。3、本部分基于低分子量肝素各糖链组成成份分布的基础上,对每个色谱峰进行指认,制备低分子量肝素中糖链长度为十糖的化合物,经过除盐、纯化得到相对纯度较高的十糖。