本研究以目前我国大力推广的优质绿化、纸浆、建材树种三倍体速生毛白杨为材料，系统的研究了杨树组织培养扩繁体系的影响因素，建立了三倍体毛白杨的快速高频再生系统：并采用根癌农杆菌共培养法、浸染法构建了三倍体毛白杨的高效遗传转化系统，将反义磷脂酶Dγ基因导入其中，使该基因得到表达，并获得了耐盐的转基因植株。具体工作如下： 一、三倍体毛白杨植株高频再生体系的建立。 选用三倍体毛白杨植株的幼嫩叶片进行划伤处理，在MS培养基上诱导产生愈伤组织。通过对其组织培养条件的研究表明，适宜的激素浓度及配比是获得高频再生体系的关键因素，而适宜的理化条件（培养基PH值、渗透压、培养温度、光照强度等）也会对植株的再生、继代与扩繁产生重要影响。选择激素的浓度与配比、琼脂浓度、暗期处理等因素进行正交试验，分别以生根率、出芽率、株高、叶片数等为检测指标，研究其高频再生条件。实验表明：进行水培催芽的毛白杨叶片愈伤组织，移入MS诱导培养基诱导芽体分化，出芽率可达到90％以上；将再生芽转移至壮苗培养基中促进其生长，两个星期左右芽体可以生长至2～5cm；此时将植株转移至生根培养基中，7～10天左右生根率可达到90～100％。培养初期的暗处理对该树种的再生频率影响不大。 二、毛白杨高效遗传转化体系的建立 在建立了杨树叶片愈伤组织高频再生系统的基础上，进行了根癌农杆菌介导的杨树遗传转化的研究。对根癌农杆菌的最适转化态、Kan选择压力、遗传转化方法、处理时间、筛选方法等因素进行了研究。结果表明，对含有PLDY基因的根癌农杆菌进行转化前的适当活化、采用15％蔗糖附加一定浓度的表面活性剂稀释菌液、将农杆菌侵染后的叶片不经冲洗而直接转到滤纸上过夜、用再生液体培养基浸润的滤纸替代再生培养基等处理方法，能够有效提高转化频率。 周波：转反义磷脂酶 D Y（PLD Y）基因获得耐盐杨树的研究三、转基因植株的遗传学鉴定 以未转化的植株为阴性对照，以质粒DNA为阳性对照，选用355启动子中的部分序列和 PLD Y反义基因中的部分序列作为模板，合成特异性引物，经行 PCR检测。结果表明，转基因植株扩增的条带和质粒中的目的条带一致，而未转化植株没有扩增出任何条带，说明外源的 PLD Y基因己经整合到毛白杨 BT－18的基因组上。进一步的PCR－Southern检测也表明外源基因的扩增是真实可信的。四、转基因植株的耐盐试验 将抗性转化植株转移至补充有 0．3～l％的 NaCI的 MS培养基上，进行耐盐筛选，以术转化的植株为对照。结果发现，在连续继代筛选3个月后．随着筛选浓度的增加，植株的黄化率上升，而转化植株比较术转化植株的黄化率明显降低。表明转基因植株的耐盐性明显提高，从而验证了PLD基因通过影响植物的信号传递系统而改变其生理功能的论点。