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目的：通过将PA-MSHC作用于人肝癌细胞HepG-2的细胞增殖抑制实验，观察其是否有直接抑制人HepG-2细胞生长的作用。同时，应用形态学、病理学方法，观察PA-MSHC是否有诱导该细胞凋亡的作用。通过Western-Blot法，检测凋亡相关蛋白的表达；阐明PA-MSHC引起人HepG-2细胞凋亡的机制。以期为肝癌的治疗提供实验依据和一种有益的思路。
方法：1.MTT法检测细胞生长抑制情况：取对数生长期的HepG-2细胞,以1×104个接种于96孔板,在培养箱中培养24h后,分别以1×108个/100μL,5×107个/100μL,2.5×107个/100μL,1.25×107个/100μL,6.25×106个/100μLPA-MSHC菌苗作用12h,24h,48h,加入MTT(5g/L),4h后加入二甲亚砜(DMSO),10分钟后酶标仪上测定490nm的吸光度值(A490),计算细胞抑制率。2.细胞形态学观察：收集PA-MSHC作用12h,24h,48h后的HepG-2细胞,荧光倒置显微镜下观察。戊二醛和锇酸固定,染色,H-600A透射电镜观察细胞超微结构并照相。3.Western-Blot检测 Bcl-2,Bax,Fas,FasL,Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9蛋白表达：收集处理24 h细胞提取细胞中总蛋白,测定出样品的蛋白质含量,然后将蛋白质在不连续聚丙烯酰胺凝胶中电泳,转膜,染色,观察结果。
结果：1.MTT法检测HepG-2细胞抑制率：肿瘤细胞的抑制率与药物浓度和作用时间成正比,实验组与对照组有明显差异(P<0.01)。2.细胞形态学观察：光镜观察见实验组细胞生长明显受抑制。电镜观察可见经PA-MSHC作用后的HepG2细胞呈现典型的凋亡表现。3.Western-Blot法检测蛋白表达:PA-MSHC作用后可引起Bax、Fas、Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2和FasL蛋白表达下调。
结论：1.绿脓杆菌制剂PA-MSHC在体外可明显抑制HepG-2细胞的生长。2.诱导肿瘤细胞凋亡是PA-MSHC对抗肿瘤的重要机制之一。3.PA-MSHC可通过死亡受体和线粒体途径诱导肿瘤细胞凋亡。