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目的:①鉴定、提取和纯化含人肿瘤坏死因子-α(human tumor necrsis factor-α, hTNF-α)基因的pSV23SHTNF 穿梭质粒。②探索利用阳离子脂质体介导pSV23SHTNF穿梭质粒转染Tca8113 舌癌细胞的最佳方法。③探讨hTNF-α基因转染对舌癌细胞生长的影响及其机理。④探讨干扰素-γ(IFN-γ)与hTNF-α基因转染联合应用对舌癌细胞生长的影响。⑤观察人胚成肌细胞转染hTNF-α基因后hTNF-α的表达水平。方法:①Western blot 分析检测hTNF-α克隆化基因在E. coli K12 MC 1061 大肠杆菌中是否有表达。②采用碱裂解提取法及改进的纯化方法获取高纯度的含hTNF-α基因的pSV23SHTNF 穿梭质粒。③用DOSPER 阳离子脂质体介导pSV23SHTNF 穿梭质粒转染Tca8113舌癌细胞后,用免疫细胞化学染色观察hTNF-α基因表达。④用DOSPER阳离子脂质体介导pSV23SHTNF穿梭质粒转染Tca8113舌癌细胞,对照组只给予等量的脂质体,不加入质粒,转染基因24、48、72、92 h 后用ELISA 法检测细胞培养上清液中hTNF-α的浓度,用MTT 法检测舌癌细胞的存活率,并用流式细胞计数分析hTNF-α基因转染抑瘤的机理。⑤将培养细胞分为2 组,其中一组转染hTNF-α基因,另一组不转染。再将每一组又分为5 个小组,每一小组分别加入IFN-γ,使其终浓度分别为0、1、10、100、1000 U/ml,培养48 h后,用MTT法测定Tca8113细胞的存活率。⑥用DOSPER 阳离子脂质体介导pSV23SHTNF 穿梭质粒转染人胚成肌细胞,对照组只给予等量的脂质体,不加入质粒,转染基因24、48、72、92 h 后用ELISA 法检测细胞培养上清液中hTNF-α的浓度,用免疫细胞化学染色观察hTNF-α基因表达。结果:①E. coli K12 MC 1061大肠杆菌表达hTNF-α蛋白,所表达的hTNF-α