【摘 要】
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目的探讨腺病毒E4orf6-CRL5 E3连接酶降解免疫相关蛋白p53的机制,为研发抗人类腺病毒的特异性药物提供理论依据。方法:通过细胞免疫荧光染色实验、Western blot法检测腺病毒蛋白E4orf6对Cullin5以及p53的细胞定位的影响以及E4orf6对Cullin5与内源性Cullin5类泛素化修饰的影响。通过实时定量荧光PCR、Western blot法检测E4orf6对与类泛素化
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目的探讨腺病毒E4orf6-CRL5 E3连接酶降解免疫相关蛋白p53的机制,为研发抗人类腺病毒的特异性药物提供理论依据。方法:通过细胞免疫荧光染色实验、Western blot法检测腺病毒蛋白E4orf6对Cullin5以及p53的细胞定位的影响以及E4orf6对Cullin5与内源性Cullin5类泛素化修饰的影响。通过实时定量荧光PCR、Western blot法检测E4orf6对与类泛素化修饰相关基因mRNA表达水平的影响以及E4orf6对SENP8和p53蛋白表达水平以及转录水平的影响。通过shRNA慢病毒包装技术构建稳定敲低E2结合酶UBE2M和UBE2F的HEK293T细胞系,用Western blot法检测UBE2M和UBE2F及其突变体对E4orf6降解p53的影响。通过Western blot法检测MLN4924对E4orf6依赖的Cullin5类泛素化修饰的影响以及对E4orf6降解p53的影响。结果:E4orf6诱导Cullin5的核定位,增强Cullin5类泛素化修饰;SENP8抑制E4orf6对p53的降解,并被E4orf6下调;Cullin5介导的E4orf6对p53的降解需要UBE2M的参与;MLN4924能抑制E4orf6依赖的Cullin5类泛素化修饰从而抑制p53的降解。结论:E4orf6通过增强Cullin5类泛素化修饰诱导p53降解,其降解p53的过程需要UBE2M的参与。SENP8能抑制由Cullin5介导的E4orf6对p53的降解,并被E4orf6下调,是E4orf6诱导p53蛋白降解的天然限制因子。MLN4924可以通过抑制Cullin5类泛素化修饰,从而抑制E4orf6对p53的降解。
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