【摘 要】
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C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),急性期蛋白之一,广泛分布于脊椎动物,人们通过高丙酮酸琼脂糖凝胶的钙依赖亲和层析,从牛血清中分离到两种不同的五肽蛋白。其中一种蛋白与某些兔抗人CRP抗血清发生交叉反应,因此被命名为牛CRP。CRP的生物学功能包括:“抗炎”和“促炎”两种活动,具有多效性。CRP水平会随着损伤、感染和炎症而急剧增加并且随着病情的缓解而迅速下降。噬菌体展示技术
【基金项目】
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国家重点研发项目资助,项目名称:畜禽群发普通病防控技术研究,项目编号:2017YFD0502200,课题名称:家畜呼吸系统疾病诊断与防控技术研究,课题编号:2017YFD0502205;
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C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP),急性期蛋白之一,广泛分布于脊椎动物,人们通过高丙酮酸琼脂糖凝胶的钙依赖亲和层析,从牛血清中分离到两种不同的五肽蛋白。其中一种蛋白与某些兔抗人CRP抗血清发生交叉反应,因此被命名为牛CRP。CRP的生物学功能包括:“抗炎”和“促炎”两种活动,具有多效性。CRP水平会随着损伤、感染和炎症而急剧增加并且随着病情的缓解而迅速下降。噬菌体展示技术是将所需的基因片段插入到丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ或丝状噬菌体Ⅷ的基因中,通过噬菌体自身的加工以及包装,将抗体分子展示在噬菌体表面。再通过抗原抗体的特异性结合从噬菌体抗体库中筛选出特异性的抗体。将牛CRP所具有的特殊生理学功能,看作是检测牛病炎症的一项指标,再将其与噬菌体展示技术相结合,得到特异且与抗原结合力高的抗体,无论应用于未来的诊断还是治疗,都具有较高的发展潜力。本课题通过表达重组牛CRP蛋白免疫Balb/c小鼠,经过研磨小鼠脾脏得到淋巴细胞,提取总RNA反转录成c DNA,进行三轮扩增后,再由噬菌体展示技术筛选CRP鼠源性单链抗体,通过以上方法,我们前期表达出浓度较高的牛原核CRP蛋白,免疫给小鼠后得到了较高的血清效价且构建了库容为1.3×108的噬菌体抗体库,最终筛选得到两株基因序列不同且与原核表达的牛CRP蛋白具有较高结合活性的阳性克隆诱导其表达鼠源性单链抗体。本课题旨在将得到的单链抗体为牛病的诊断及治疗提供可靠依据。而牛CRP的利用价值国内外研究较少,因此本试验对于牛CRP的研究也提供了广阔的应用前景并具有重要的意义。
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