CTGF反义寡核苷酸对肾小管上皮细胞转分化的作用

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目的:肾间质纤维化(RIF)几乎是各种肾脏疾病进展至终末期肾功能衰竭的共同途径。在RIF的发生发展中,肾小管上皮细胞肌纤维母细胞转分化(TEMT)起着重要作用。转化生长因子(TGF-β)是诱导TEMT的重要细胞因子之一。结缔组织生长因子(CTGF)是TGF-β的下游介质。反义寡核苷酸通过特异地阻断靶基因的表达而起到反义作用,CTGF反义寡核苷酸能否特异地抑制CTGF对TEMT作用,尚有待证明。本实验通过研究CTGF反义寡核苷酸对TGF-β1诱导的TEMT及细胞外基质胶原Ⅲ的影响,反证TGF-β-CTGF的致TEMT及纤维化作用,并通过CTGF反义寡核苷酸对CTGF的特异性阻断作用,为RIF的防治提供新的方法。 方法:将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白组、TGF-β1组、空脂质体组、反义对照组和反义组,每组设三复孔。经脂质体介导基因转染后,加TGF-β1刺激48h。以RT-PCR检测CTGF反义寡核苷酸对CTGF的阻断作用,以RT-PCR、流式细胞仪和免疫组织化学方法定量及定性检测肌纤维母细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞形态和超微结构,
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