本文旨在研究急性期反应条件下,日粮中添加二氢杨梅素(APS)对仔猪机体代谢、炎性反应、氧化还原状态、肝脏线粒体功能的影响。本试验通过LPS建立急性期反应模型,从炎症因子、急性期反应蛋白(APPs)、氧化应激三个方面,研究了APS对急性期反应的调节作用。第一,研究APS的体外抗氧化能力。本试验主要目的是研究APS的体外抗氧化作用和对水溶性刺激剂2,2-偶氮二(2-甲基丙基咪)二盐酸盐(AAPH)引起红细胞氧化损伤的保护作用。首先是研究了APS对包括DPPH、ABTS、H2O2和O2-等在内的不同自由基清除作用和APS的总抗氧化能力评价(FRAP)。其次,研究APS对由AAPH诱导猪红细胞氧化应激引起早期细胞凋亡的保护作用。研究结果表明,APS在不’同浓度下均能清除DPPH、ABTS、H2O2和O2‘-离子具有较强的抗氧化作用,清除率高于BHA和Trolox。在2-60 μg/mL范围内APS的抗氧化能力与浓度呈依赖关系。另外,APS表现出对AAPH诱导的红细胞氧化应激具有强大的抗氧化性能,能够显著抑制AAPH诱导的氧化溶血,脂质过氧化,并抵抗红细胞中SOD活性降低。APS抑制AAPH诱导红细胞凋亡呈浓度和时间依赖性。第二,APS对断奶仔猪生产性能的影响。选用36头健康的27±1日龄断奶仔猪,分为3个处理组,每个处理组的日粮是分别在基础日粮的基础上添加0 mg/kg(对照组)、100 mg/kg和400 mg/kg APS,试验期28 d。结果表明,对照组及各APS组间仔猪的体增重(BWG)和采食量(FI)没有显著差异(P>0.05),但日粮中添加APS能显著降低仔猪的料重比(F/G)(P<0.05)。第三,APS对急性期反应仔猪血液生化指标、激素水平及细胞因子的影响。本试验中以LPS诱导断奶仔猪建立急性期反应模型,研究APS对急性反应仔猪的血清中细胞因子,肝脏功能敏感酶,血糖、血脂、蛋白质及相关激素的变化的影响。24头断奶仔猪根据单因素因子试验设计分为4组,即无应激(腹膜注射等量生理盐水)、LPS应激(腹膜注射25μg/kg·BW)、日粮中添加APS浓度100和400 mg/kg+LPS刺激组。试验期28d。试验结果表明：与注射生理盐水组相比,LPS组仔猪血液炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-α都显著升高(P<0.05)；与LPS组相比,APS仔猪血液炎性因子显著降低(P<0.05)。LPS刺激后,血液中Glu、Leptin、PGE2显著升高(P<0.05),Insulin、IGF-1显著降低(P<0.05),GH无显著变化；相对于LPS刺激组,APS添加能显著缓解急性期反应导致的激素浓度变化(P<0.05). LPS可刺激仔猪血液中血糖、ALB浓度降低(P>0.05), NEFA、TG显著升高(P<0.05), TP、TC、BUN无显著变化(P>0.05)；APS能显著降低LPS诱导的NEFA升高(P<0.05)；LPS刺激组中ALT、AST、ALP、LDH比生理盐水对照组中显著升高(P<0.05), APS均能显著降低LPS诱导的ALT、AST、ALP和LDH分泌增加(P<0.05)。第四,APS对仔猪肝脏炎性反应的影响。本试验研究APS对急性期反应仔猪肝脏炎性因子和急性反应蛋白基因表达、Akt-NF-KB和STATA3蛋白信号途径的作用。试验结果显示：(1)炎性细胞因子方面。与注射生理盐水组相比,LPS组仔猪肝脏TLR2和TLR4基因表达水平显著升高(P<0.05), IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与LPS组相比,APS组显著降低仔猪肝脏IL-1β、IL-6、TNF-α和COX-2 mRNA表达水平(P<0.05)。LPS刺激肝脏p-Akt蛋白表达量显著升高(P<0.05),日粮中APS具有降低p-Akt蛋白表达的趋势,但与LPS组和空白差异均不显著(P>0.05)。LPS刺激断奶仔猪肝脏中NF-κB与DNA结合活性显著升高(P<0.05)。相对于LPS组,日粮中添加APS能显著降低NF-κB与DNA结合活性(P<0.05),且400 mg/kg APS组与空白对照组无显著差异。(2)急性反应蛋白方面。LPS引起急性反应后,肝脏中能控制APPs合成的炎性因子IL-1β、IL-6,、TNF-α浓度显著升高(P<0.05), APS组中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度显著低于LPS刺激组(P<0.05)。LPS刺激肝脏Cort浓度显著升高(P<0.05),GRmRNA表达水平显著降低(P<0.05)；APS能够显著降低LPS引起的Cort浓度升高,增加肝脏GR　mRNA表达水平,400 mg/kg APS组GR　mRNA表达水平显著高于生理盐水对照组(P<0.05)。LPS刺激后,仔猪肝脏中p-STAT3蛋白表达量显著升高(P<0.05)；相对于LPS组,日粮中添加APS能显著(P<0.05)降低p-STAT3蛋白表达量。LPS刺激后,仔猪肝脏中CRP和SAA2 mRNA表达浓度显著升高(P<0.05)；与LPS组相比,400 mg/kg APS组能够降低CRP和SAA2 mRNA (P<0.05)。LPS刺激后,仔猪肝脏中AGP mRNA表达水平与对照组没有显著差异(P>0.05)；与LPS组相比,APS能够增加AGP mRNA表达,其中400 mg/kg APS组与对照组、LPS组均显著差异(P<0.05)。LPS刺激和APS添加对仔猪肝脏中AAT、CC3、CP mRNA表达水平无显著影响(P>0.05)。通过肝脏组织形态学观察结果表明日粮中添加APS可以减弱LPS诱导的肝损伤。第五,APS对LPS诱导仔猪肝脏抗氧化功能的影响。其一,研究APS对急性期反应仔猪肝脏抗氧化酶及氧化应激相关Ref-1和Nrf2蛋白表达量,及其下游主要酶mRNA表达水平的影响。其二,从线粒体抗氧化酶、三羧循环酶、膜功能及相关酶、ATP含量方面研究APS对肝脏线粒体功能影响和对LPS诱导氧化损伤的保护作用。试验结果表明：(1)APS对LPS诱导仔猪肝脏氧化还原状态失衡的缓解作用。LPS刺激后,肝脏中抗氧化酶中GSH-Px、T-SOD和CAT活性显降低(P<0.05)。与LPS组相比,400 mg/kg APS组仔猪肝脏抗氧化酶T-SOD和GSH-Px活性显著升高(P<0.05)。LPS刺激仔猪肝脏中MDA和蛋白羰基含量显著升高(P<0.05)；100和400 mg/kg APS组中MDA的含量比LPS组中低15.5%(P>0.05)和31.7%(P<0.05)。APS组中蛋白羰基含量与LPS组、对照组均没有显著差异(P>0.05)。 LPS刺激后,肝脏Ref-1和p-Nrf2蛋白表达量显著升高(P<0.05),400mg/kg APS组能显著缓解LPS诱导的Ref-1和p-Nrf2蛋白表达量升高(P<0.05)。LPS能显著增加仔猪肝脏Nrf2下游HO-1、GST. PRX3、MCP-1 mRNA (P<0.05)表达水平,APS组中上述基因的mRNA表达均呈下降趋势,且400mg/kgAPS组中PRX3、MCP-1与LPS组差异显著(P<0.05)。(2)研究APS对仔猪肝脏线粒体氧化损伤的保护作用。LPS引起急性反应后,肝脏线粒体抗氧化酶Mn-SOD、GSH-Px和GRe的活性都显著降低(P<0.05),APS组均能显著缓解LPS诱导线粒体抗氧化酶活性降低的影响(P<0.05)。LPS刺激显著升高线粒体中MDA、GSSG(P<0.05)浓度,同时显著降低GSH、GSH/GSSG浓度(P<0.05)。400 mg/kg APS组仔猪肝脏线粒体比LPS组中MDA、GSSG分别低11.67%(P<0.05)和36.36%(P<0.05), GSH/GSSG高32.94%(P<0.05),GSH没有显著差异(P>0.05)。LPS刺激后,线粒体中mtNOS活性和NO浓度显著升高(P<0.05), APS能显著缓解LPS诱导的mtNOS升高(P<0.05)和具有降低NO浓度的趋势(P>0.05)。LPS刺激后线粒体三羧酸循环酶SDH、MDH显著降低(P<0.05), APS均能显著缓解LPS诱导SDH和MDH活性降低的影响(P<0.05)。与注射生理盐水组相比,LPS能显著降低仔猪肝脏线粒体ATP浓度,日粮中添加APS具有抑制ATP减少的趋势,但与LPS组的结果差异不显著(P>0.05)。LPS刺激后能引起仔猪线粒体膜电位降低(P<0.05), APS (400 mg/kg)组与LPS组相比能显著增加线粒体膜电位(P<0.05),与正常组无显著差异(P>0.05). LPS刺激后能显著降低仔猪肝脏线粒体中Ca2+-ATP酶活性(P<0.05),APS的添加具有抑制Ca2+-ATP酶活性降低的趋势,但差异不显著(P>0.05)。综合试验结果表明：(1)二氢杨梅素具有强大的体外抗氧化活性。(2)日粮中添加APS一方面可以通过减弱Akt蛋白表达量,减少转录因子NF-κB与DNA结合,降低炎性因子基因表达水平,避免致炎/抗炎因子平衡被打破；另一方面通过抑制Cort和提高GR基因表达水平,减弱p-STAT3蛋白表达量,降低急性期反应蛋白基因表达水平,从而缓解LPS诱导的急性期反应。(3)APS通过保护抗氧化酶活性,提高细胞氧化还原平衡状态,减弱ROS信号作用,避免过度激活APE/Ref-1蛋白表达量,使得转录因子处于还原状态,从而从氧化还原途径调控急性期反应。(4)日粮添加APS可通过调节炎症因子和神经内分泌功能,能较好的缓解动物的炎症反应,以及由此引起的葡萄糖、蛋白质和脂肪代谢紊乱。(5)APS通过维护线粒体膜电位稳定、线粒体内三羧循环和抗氧化酶的活性而保护线粒体的结构和功能,减少线粒体产生ROS,限制线粒体参与氧化应激,进而避免氧化应激过度激发急性期反应。