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以枯草芽胞杆菌BAB-1菌株为有效成分加工制成的生物农药可以有效防治番茄灰霉病。但是,生物农药在田间应用过程中存在货架期短和潜在抗药性风险等问题,本研究针对生物农药田间应用中的这两个问题进行研究,并提供解决方案。
为了提高枯草芽胞杆菌BAB-1芽胞的耐热性,分别在培养前和培养后的发酵液中添加助剂A,研究助剂A对枯草芽胞杆菌BAB-1芽胞耐热能力的影响,以延长其货架期。结果表明,添加助剂A能显著提高芽胞的耐热性,助剂A浓度为0.2%时对芽胞耐热度提高效果最好,浓度过高或者过低均不利于其发挥耐热性能;培养基中添加助剂A可以缩短芽胞的形成时间,提高芽胞形成率和芽胞耐热性;发酵液中添加助剂A亦能显著提高芽胞耐热性;通过设置助剂A与芽胞在不同温度处理下的互作实验,间接证实了在大于等于65℃条件下,A离子能够渗透进入芽胞内部,增强芽胞耐热性。
为了评估枯草芽胞杆菌BAB-1生物农药在田间应用中的抗药性风险,本研究以番茄灰霉菌为靶标病原菌,利用含药平板法驯化诱导番茄灰霉菌抗性菌系,分别检测枯草芽胞杆菌BAB-1上清液、脂肽粗提液和丰产素(fengycin)的抗药性风险。结果表明,番茄灰霉菌经上清液驯化9代后,其EC50值由0.043mL/L提高至0.061mL/L,抗性水平为初始菌株的1.42倍,未形成抗性菌株;番茄灰霉菌经脂肽粗提液驯化9代后,其EC50值由0.330mg/L变为0.321mg/L,抗性水平为初始菌株的0.97倍,未形成抗性菌株;番茄灰霉菌经fengycin驯化9代后,其EC50值由2.922mg/L提高至112.186mg/L,抗性水平为初始菌株的38.39倍,形成抗性菌株;在fengycin含药平板中添加20mg/L的表面活性素(surfactin),fengycin抗性菌株的EC50由112.186mg/L降低至7.77mg/L,显著降低了抗性菌株对fengycin的抗性水平。