论文部分内容阅读
目前,我国部分养猪场常将灭活疫苗(含水性疫苗佐剂)稀释活疫苗后同时免疫动物,达到降低疫苗免疫次数和提升免疫效果的目的,例如猪圆环灭活疫苗稀释猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、猪支原体灭活疫苗稀释猪繁殖与呼吸综合征活疫苗、副猪嗜血杆菌灭活疫苗稀释猪瘟活疫苗。但水性疫苗佐剂能否影响活疫苗的免疫效果以及如何产生影响目前尚不清楚,为此,本论文将水性疫苗佐剂(MONTANIDE?Gel 01 ST,卡波姆、黄芪多糖、左旋咪唑和壳聚糖)和SCYA201201株JEV减毒株作为研究对象开展相关实验,以阐明水性佐剂对活疫苗免疫原性的影响以及影响机理。实验第一部分是筛选商品化水性疫苗佐剂(MONTANIDE?Gel 01 ST)的最适浓度和SCYA201201株JEV减毒株的最佳滴度混合后免疫小鼠,开展免疫指标检测、攻毒保护、不同基因型(基因Ⅰ型和Ⅲ型)间交叉保护、抗体消长规律及环境温度对疫苗免疫效果影响等实验。结果显示,Gel 01 ST佐剂最适浓度为10%,减毒株最佳滴度为107.0PFU/mL,此时保护率为100%(10/10)。相比于单独免疫减毒株,佐剂的加入可以诱导更高的IgG1/IgG2a抗体(p<0.01)以及中和抗体(p<0.01),并且显著提高淋巴细胞增殖水平(p<0.01)和细胞因子含量,尤其是干扰素伽马(INF-γ)含量(p<0.01)。佐剂也能够增强不同基因型强毒株间的交叉保护率(分别为90%和100%),并且从免疫第5天开始为小鼠提供较高的抗体水平(p<0.01)和保护率(≥80%)。甚至减毒株在室温(25℃)放置部分病毒失活后,与佐剂联用仍然能够提供66.7%以上的保护率,高于单独免疫减毒株组。研究结果表明,Gel 01 ST能够用于JEV活疫苗的免疫,且能通过提高机体的各项免疫指标提升疫苗的免疫效果。实验第二部分是将配制的卡波姆、黄芪多糖、左旋咪唑和壳聚糖佐剂单独或复合后与JEV减毒株混合免疫小鼠,然后开展抗体水平检测和攻毒保护实验,探究配制的水性佐剂对SCYA201201株JEV减毒株免疫效果的影响。实验结果显示,四种佐剂单独使用时,只有4mg/mL浓度的卡波姆对减毒株免疫后的抗体水平有微弱的增强,其余佐剂均无效果;而佐剂混合使用时,抗体水平和攻毒保护率均低于单独免疫减毒株的实验组。研究结果表明,自制的水性佐剂不能增强JEV减毒株的免疫效果反而具有免疫抑制作用,这提示我们活疫苗在临床应用时,需要避免一些药物(或化学复合物)对活疫苗免疫效果产生不利影响。