新型疫苗由于具有较低的免疫原性而需要免疫佐剂的辅助,以提高免疫应答水平,纳米粒作为免疫佐剂已得到广泛的研究。纳米结构脂质载体（NLCs）由于其包封率高,可以高效包载抗原物质或免疫刺激物质,能够增强抗原的稳定性,保护抗原不被降解。角鲨烯作为已上市的安全佐剂MF59的主要成分,其作为免疫佐剂具有巨大的潜力,而壳聚糖对纳米粒的修饰可以促进细胞对纳米粒的摄取。因此,本研究拟结合以上物质的优点,制备一种基于角鲨烯的阳离子纳米结构脂质载体（csNLCs）,并考察其免疫佐剂作用。首先利用高剪切-超声分散法制备csNLCs,以筛选固态脂质和液态脂质的比例、乳化剂的种类和质量、壳聚糖的浓度,通过一系列表征确定最优处方。得到的最优处方为软脂酸与角鲨烯比例1:9,吐温80和司盘85 1:1复配（共占混合脂质30%）作为乳化剂,壳聚糖溶液浓度0.1%,最优csNLCs处方粒径为235.80±5.991 nm,zeta电位为34.90±6.954mV,PDI为0.283±0.015,透射电镜下观察粒子呈球形,无团聚,可以看到壳聚糖包被纳米粒的电晕。然后将模拟抗原鸡卵清白蛋白（OVA）包载在csNLCs中,以制备后续实验需要的OVA-csNLCs,最终得到的OVA-csNLCs粒径为222.1±14.22 nm,PDI 为 0.351±0.024,zeta 电位为 19.03±0.306mV,包封率（EE）达 83.36%,SDS-PAGE电泳结果显示OVA-csNLCs滤液中未包载的游离OVA条带与同浓度纯OVA溶液的条带相比在同一位置且颜色浅,证明了 OVA的包载。同时,为了生产储存中OVA-csNLCs能够长期保持活性,筛选了冻干保护剂并将其制备成冻干粉,根据冻干后的形貌以及复溶后的质量评价,确定10%蔗糖作为冻干保护剂,复溶后OVA-csNLCs粒径为 218.5±5.59 nm,PDI 为 0.256±0.036,zeta 电位为 14.17±0.153 mV。之后通过RAW264.7巨噬细胞和Balb/c小鼠进行体外和体内实验,评价csNLCs作为佐剂的效果。先利用MTT法筛选了 csNLCs和OVA-csNLCs的安全浓度,显示csNLCs无明显毒性,具有良好的生物相容性。然后将FITC-OVA和FITC-OVA-csNLCs在体外与RAW264.7共同培养,通过流式细胞术分析FITC-OVA组和FITC-OVA-csNLCs组的细胞荧光强度,以比较细胞对抗原的摄取能力,结果表明,随着csNLCs浓度的增加,荧光强度也不断增加,而相同浓度下FITC-OVA的荧光强度变化不明显,说明csNLCs能够促进巨噬细胞对抗原的摄取,增强抗原递呈细胞对抗原的内化。随后将40只小鼠分为空白组、OVA组、csNLCs组和OVA-csNLCs组,共免疫两次,并在免疫期间记录小鼠体重,在第二次免疫后第7天提取血清和脾细胞,选择酶联免疫吸附测定法对小鼠血清中的IgG抗体滴度和IL-4、IFN-γ两种细胞因子含量进行检测,结果发现OVA-csNLCs组小鼠血清中IgG抗体的含量远远超过其余组的水平,表明csNLCs作为佐剂能够刺激机体的体液免疫应答;另外,IL-4的含量显示csNLCs组和OVA-csNLCs组高于其余组,但IFN-γ的含量除空白组外水平相当,提示OVA-csNLCs引起的免疫应答更偏向于Th2型。在整个免疫过程中,各组小鼠的体重变化趋势相似,且未发生死亡,表明了 csNLCs作为佐剂的安全性。同样地,当各组脾淋巴细胞在体外给予同样浓度的抗原OVA溶液刺激再培养后,OVA-csNLCs组小鼠的脾脏淋巴细胞增殖比大于其余各组,再次证明了 csNLCs具有增强免疫应答的功能。本研究初步制备了一种具有免疫佐剂作用的纳米结构脂质载体,为新型佐剂的研发提供了新的思路,但还有待进一步的完善和考察。