【摘 要】
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目的探讨从日本大耳白兔骨髓中分离CD34+细胞,并诱导、鉴定其分化为内皮细胞的方法。方法采用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法进行筛选分离,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导
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目的探讨从日本大耳白兔骨髓中分离CD34+细胞,并诱导、鉴定其分化为内皮细胞的方法。方法采用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法进行筛选分离,内皮细胞生长因子(VEGF)诱导分化从骨髓中分离、培养的CD34+细胞,分别通过倒置显微镜、免疫细胞化学进行鉴定。结果对骨髓CD34+细胞进行细胞培养并绘制细胞生长曲线,可见细胞从第7天开始进入指数生长期,生长旺盛,细胞呈“S”型生长；CD34+细胞培养2周的细胞覆盖底部的瓶子,并达到高峰的增殖,细胞呈鹅卵石状排列。凝血因子Ⅷ,CD31免疫组化染色均为阳性；免疫荧光发现贴壁细胞呈现红色荧光,提示细胞摄取Dil-AcLDL,证明CD34+细胞分化为有功能的内皮细胞。结论(1)用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法可分离出较多的CD34+细胞。(2)CD34+细胞培养、诱导2周细胞达增殖高峰。(3)CD34+细胞能够分化为有功能的血管内皮细胞。
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