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研究目的:1.检测超氧化物歧化酶2(Superoxide dismutase 2,SOD2)在肺腺癌A549细胞和A549干细胞中蛋白及mRNA表达水平。2.初步探讨SOD2对肺腺癌A549干细胞的调控和顺铂耐药及侵袭的影响。方法:1.用10%FBS培养基培养A549细胞,无限稀释法挑选紧密型单克隆A549细胞,用SFM培养基培养出二代A549干细胞球。2.CCK8试剂盒检测A549细胞和A549干细胞球的增殖差异,不同浓度顺铂下两种细胞存活率变化,及A549干细胞球经siRNA-SOD2转染后增殖情况。3.试剂盒分别检测不同浓度顺铂作用A549细胞及A549干细胞活性氧ROS含量和SOD2浓度,以及经siRNA-SOD2转染A549干细胞后ROS含量变化。4.Western Blot和RT-PCR分别检测A549细胞及A549干细胞球SOD2蛋白及mRNA表达水平,并检测这两种细胞多种转录因子(Bmi-1、Nanog、Sox2、Oct4)和凋亡蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达水平差异,以及A549干细胞经不同浓度顺铂作用下SOD2、Bax、Bcl-2、Caspase3蛋白表达水平变化。5.用siRNA-SOD2转染A549干细胞球,用Western blot和RT-PCR检测干扰SOD2蛋白及mRNA表达水平,验证其转染效率并筛选出最合适的干扰片段。6.Western blot检测干扰SOD2基因后A549干细胞中多种转录因子的蛋白表达情况,并观察肿瘤干细胞再成球率变化。7.用Western blot和流式细胞仪(FCM)共同检测A549干细胞球经siRNA-SOD2转染后细胞凋亡率变化情况。8.Western blot法检测A549细胞及A549干细胞EMT相关蛋白(E-cadherin、Vimentin蛋白)差异,同时检测A549干细胞转染siRNA-SOD2后细胞E-cadherin、Vimentin蛋白变化。9.Transwell试验检测A549细胞及A549干细胞侵袭差异,以及检测A549干细胞转染siRNA-SOD2后细胞侵袭数目变化情况。结果:1.A549细胞与A549干细胞球随顺铂浓度增加,细胞增殖能力明显下降,其ROS含量和SOD2浓度逐渐升高,与A549细胞相比,A549干细胞球增殖、抗凋亡能力及SOD2浓度明显更高,而ROS含量更低。2.A549干细胞随顺铂浓度逐渐递增,SOD2、Bax、Caspase3蛋白表达水平逐渐升高,相反Bcl-2蛋白表达逐渐下降。3.与A549细胞相比,A549干细胞球中SOD2蛋白及mRNA表达水平较高,Bmi-1、Nanog、Sox2、Oct4多种转录因子蛋白表达也更高。4.A549干细胞球转染siRNA-SOD2后SOD2蛋白和mRNA表达水平下降,干性因子(Bmi-1、Nanog、Sox2、Oct4)蛋白表达水平降低,且肿瘤干细胞增殖率和再成球能力也下降,而ROS含量增加。5.Western blot和FCM结果表明A549干细胞球转染siRNA-SOD2联合顺铂后细胞的凋亡率明显升高。6.Transwell试验与Western Blot结果显示A549细胞的侵袭能力低于A549干细胞,A549干细胞球经siRNA-SOD2转染后其细胞侵袭能力下降。结论:1.肺腺癌A549细胞与A549干细胞球随顺铂浓度增加,细胞增殖能力下降,其ROS含量和SOD2浓度逐渐升高。2.与肺腺癌A549细胞相比,肺腺癌A549干细胞中SOD2蛋白及mRNA表达水平更高。3.SOD2是维持人肺腺癌A549干细胞顺铂耐药及侵袭的原因之一。