【背景与目的】二甲基精氨酸二甲胺水解酶1(DDAH1)是近年来逐渐被重视的蛋白,DDAH1主要通过水解代谢内源性一氧化氮合酶(NOS)竞争性抑制剂非对称性二甲基精氨酸(ADMA)起作用,参与调节多种生理病理过程,包括血管生成、肿瘤生长等。目前DDAH1与胃癌的研究较少,本实验旨在验证DDAH1在胃癌组织中的表达情况并探讨其表达与各临床病理参数之间的关系,并构建过表达DDAH1胃癌稳转株MGC803,进一步研究DDAH1对胃癌的生物学影响。【方法】1.应用蛋白质免疫印记验证DDAH1在8对胃癌组织和其配对癌旁黏膜组织的表达水平。2.通过组织芯片技术结合免疫组化技术测定170对胃癌及其配对的癌旁正常黏膜组织中DDAH1的表达情况,并分析肿瘤TNM分期、分化程度、周围神经侵犯、组织学分型等临床病理参数与DDAH1的关系。3.运用基因重组技术将DDAH1的基因序列克隆至p CDH载体上,构建p CDH-DDAH1重组质粒,经酶切鉴定及测序鉴定正确后,通过磷酸钙共沉淀法构建过表达DDAH1的胃癌稳转细胞株MGC803,并通过荧光、Western blot验证DDAH1表达情况。4.用CCK8法、流式细胞仪测定过表达的DDAH1蛋白对完全培养基和无血清培养基培养的MGC803细胞增殖和凋亡的影响。【结果】1.DDAH1在胃癌组织中呈低表达,癌组织与癌旁正常黏膜组织阳性表达率分别为25.9%和75.3%(p<0.001),且表达与TNM分期、分化程度、周围神经侵犯、组织学分型相关。2.成功构建p CDH-DDAH1重组质粒,并建立胃癌稳转细胞株MGC803-DDAH1,转染后DDAH1蛋白表达水平明显升高。3.CCK8法测定过表达的DDAH1蛋白对MGC803细胞增殖、凋亡的影响,结果显示,过表达的DDAH1蛋白对完全培养基培养MGC803增殖无明显影响,但可促进血清饥饿诱导的MGC803细胞凋亡,差别有统计学意义。4.流式细胞仪结果显示,在全培养基培养72小时后MGC803-DDAH1与MGC803-Vector细胞的细胞凋亡率无明显差别(P>0.05),而在血清饥饿72小时后MGC803-DDAH1组的细胞凋亡率明显高于MGC803-Vector组(P<0.01)。【结论】1.DDAH1在胃癌组织中呈低表达,且DDAH1表达与TNM分期、分化程度、周围神经侵犯、组织学分型相关。2.成功构建过表达DDAH1的胃癌稳转细胞株MGC803-DDAH1。3.过表达的DDAH1蛋白对胃癌MGC803细胞增殖无明显影响,但可促进血清饥饿诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。