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目的本研究发现,在高压水注射HBV复制小鼠模型中,IFN-y能够延长HBV持续时间,但其具体的作用机制尚不明确。因此,本研究从病毒学及免疫学角度来探讨IFN-γ延长HBV持续时间的机制。方法1.采用高压水注射的方法将pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-null或pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-y质粒转染到BALB/c小鼠肝细胞内,不同时间点采集小鼠血清和肝脾标本,ELISA方法检测小鼠血清HBV抗原和抗体,免疫组化检测肝内HBcAg表达水平,Real-Time PCR检测HBV复制水平及肝内免疫相关分子的mRNA水平,ELISPOT检测HBV特异性免疫应答,FACS检测肝脾内淋巴细胞PD-1和FoxP3的表达,H&E染色观察肝脏炎性浸润,IFCC法测血清ALT水平。观察IFN-y对HBV的作用并探讨IFN-y是否通过调节HBV特异性免疫应答及免疫负调控来延长HBV持续时间。2.将质粒pcDNA3.1(+)/HBs采用肌肉注射联合电击免疫BALB/c小鼠,免疫后2周,高压水注射pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ质粒,不同时间点采集小鼠血清,ELISA法检测HBV抗原和抗体水平,观察IFN-y对HBV的作用。3.高压水注射方法将HBeAg/core-null pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-γ或pcDNA3.1(+)/HBs和pCMV2/IFN-γ分别转染BALB/c小鼠,不同时间点采集小鼠血清,ELISA检测血清HBV抗原和抗体水平,观察IFN-y对HBsAg持续时间的影响。结果1.HBV平均持续时间为：pAAV/HBV1.2组为28天、pCMV2/IFN-null处理组为22.8天、pCMV2/IFN-γ处理组为44.6天。结果表明,IFN-y显著延长HBV在BALB/c小鼠体内持续时间(P=0.000)。2. IFN-y具有抗HBV作用,早期抑制HBV复制及表达,晚期促进HBV持续。3. IFN-y抑制HBsAb和HBcAb产生,抑制HBV体液免疫应答。pAAV/HBV1.2注射后第10天,IFN-y抑制HBcAg特异性T细胞免疫应答；第20天,3组间没有统计学差异；第30天,IFN-y促进HBcAg特异性T细胞免疫应答持续。此外,在第10、20、30天,未检测到HBsAg特异性T细胞免疫应答。4. IFN-y在第注射后10、20、30天均未诱导肝脾淋巴细胞PD-1及FoxP3的表达,但诱导肝内PD-L1、NOS2、IDO、SOCS等分子高表达。5.在pAAV/HBV1.2小鼠模型中,注射低剂量pAAV/HBV1.2(2.5μg), IFN-y延长HBV持续时间(P=0.009)；注射高剂量质粒(50μg), IFN-y延长HBV持续时间(P=0.015)。6. pcDNA3.1(+)/HBs基因免疫小鼠成功后,再注射pAAV/HBV1.2和pCMV2/IFN-y, IFN-y促进HBsAb产生,促进HBV清除。7.在HBeAg/core-null pAAV/HBV1.2小鼠模型中,IFN-y则促进HBsAg的清除(P=0.036)。在pcDNA3.1(+)/HBs小鼠模型中,IFN-y对HBsAg清除无影响。结论1.在BALB/c小鼠模型中IFN-y早期抑制HBV复制和表达,同时抑制HBV体液免疫应答,并且延长HBV持续时间。2. HBcAg引发的特异性免疫应答与病毒清除无直接关系,IFN-y也未通过诱导免疫负调控来延长病毒的持续。3. IFN-γ延长HBV持续时间与抑制HBcAg免疫应答及HBsAb产生有关。本研究的创新点1.在HBV复制小鼠模型中发现IFN-y延长HBV持续时间。2.阐明IFN-y延长HBV持续时间与抑制HBcAg免疫应答有关。本研究的意义IFN-γ是一个多功能细胞因子,其作用效果和机制与病毒和宿主的多种因素有关,本研究以高压水注射HBV复制小鼠模型为基础,探讨IFN-γ延长HBV持续时间的作用机理,为揭示HBV持续感染的机制和其诱导的免疫学效应提供实验依据。