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为了建立猪肺泡巨噬细胞(PAMs)不同亚型及研究不同亚型与PRRSV之间的关系,本试验在体外通过IFN-y/LPS诱导PAMs分化成M1型巨噬细胞,通过IL-4诱导分化成M2型巨噬细胞。通过Calcein-AM染色和电镜观察不同组细胞形态学变化。通过M1型巨噬细胞相关标志分子NO、IL-12鉴定M1型巨噬细胞诱导分化成功,通过M2型巨噬细胞相关标志分子Arg-1、IL-10鉴定M2型巨噬细胞诱导分化成功。正常的PAMs感染PRRSV后,测定M1、M2相关性分子的表达量,拟研究PAMs感染PRRSV后极化类型。体外成功刺激M1和M2不同亚型的PAMs与PRRSV共培养,通过测定M1、M2相关性分子,拟研究PRRSV对M1和M2两种亚型PAMs的影响。为了检测NO的表达量,不同组细胞24h后提取上清,Griess法检测各组NO表达量显示,IFN-γ/LPS刺激的PAMs组相比较未刺激组和IL-4刺激组高表达,显示出极显著差异(P<0.01)。不同组细胞培养刺激24～72h,48h提取蛋白,Western结果显示,IL-4刺激的PAMs组相比较IFN-γ/LPS刺激组和未刺激组高表达,M2型巨噬细胞的标志性分子Arg-1显示出极显著差异(P<0.01)。同时,IFN-γ/LPS刺激的PAMs组相比较IL-4刺激组和未刺激组,M1型巨噬细胞相关性分子IL-12表现出极显著差异(P<0.01),IL-4刺激组相对于IFN-γ/LPS刺激组和未刺激组,M2型巨噬细胞相关性分子IL-10表现出极显著差异(P<0.01)。通过M1型相关标志分子NO、IL-12, M2型相关标志分子Arg-1、IL-10四种细胞因子的差异性表达,提示我们在体外成功诱导了M1型和M2型猪肺泡巨噬细胞。为探究PAMs感染PRRSV后极化类型,分别设置了100TCID50、500TCID50、1000TCID50.5000TCID50不同病毒滴度的PRRSV组感染PAMs,按照上述的方法检测NO、Arg-1、IL-12、IL-10的表达量。测定结果显示,不同剂量的PRRSV感染PAMs后,M2型巨噬细胞相关分子Arg-1、IL-10表达量高,表现出显著(P<0.05)或极显著差异(P<0.01),M1型巨噬细胞相关分子NO、IL-12表达量略微上调,提示我们PAMs体外感染PRRSV后,PAMs向M2型极化。为探究PRRSV对M1和M2两种亚型PAMs的影响,首先,将PAMs体外诱导分化成M1和M2两种亚型的巨噬细胞,两种亚型PAMs感染PRRSV后培养12-72h,用Griess法检测NO含量的变化,Western检测Arg-1、IL-10、IL-12细胞因子表达量的变化。结果显示,M1型PAMs感染PRRSV后会向M2型巨噬细胞转化,M2型PAMs感染PRRSV后变化不大。结论：利用IFN-γ/LPS体外刺激PAMs成功诱导M1型巨噬细胞,利用IL-4成功诱导M2型PAMs。PAMs体外感染PRRSV后,RAMs向M2型极化。M1型RAMs感染PRRSV后会向M2型巨噬细胞转化,M2型PAMs感染PRRSV后变化不大。