糖皮质激素增强人ACAT1基因表达和人细胞内源表达ACAT1蛋白的分析鉴定

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酰基辅酶 A:胆固醇酰基转移酶(ACAT)是细胞内唯一合成胆固醇脂的酶,在胆固醇及其酯类代谢平衡中起非常重要的作用。其中 ACAT1 广泛存在于各种细胞中,与病理性的动脉粥样硬化病变密切相关。地塞米松(Dexamethasone, Dex)是一种糖皮质激素(Glucocorticoid),大量临床研究表明其具有非常显著升高动脉粥样硬化发病率的作用。本实验室已经发现Dex 可以非常显著地促进低浓度 OX-LDL 诱导巨噬细胞形成泡沫细胞。本工作进一步利用 Western blot 检测 Dex 对人内源 ACAT1 蛋白水平的影响,其结果显示 Dex 能显著增加培养的单核细胞 THP-1 及其佛波酯(PMA)诱导分化的巨噬细胞中人 ACAT1 蛋白的表达量。进而,通过构建含人 ACAT1 基因启动子的荧光素酶报告基因表达质粒,进行细胞瞬时转染表达研究结果显示,Dex 作用于培养的 THP-1,对人 ACAT1 基因启动子转录活性具有明显的增强作用。同时,利用 Western blot 和免疫组织化学方法,在佛波酯(PMA)诱导分化成熟的人单核/巨噬细胞系(THP-1)中检测到了 50 kDa 和 56 kDa 两种形式的 ACAT1 蛋白的表达。通过免疫组化和免疫双荧光分析结果表明,这两种蛋白具有相同的细胞定位。这些为深入研究阐明 ACAT 在胆固醇及其酯类代谢平衡和动脉粥样硬化病变中的生理功能或病理变化机理等,提供了重要的分子基础和研究线索。
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