产志贺毒素大肠杆菌(shiga toxin-producing E.coli，STEC)又称产Vero毒性大肠杆菌(Vero toxin-producing E.coli，VTEC)，已经成为一种可以导致食品污染和引起人类严重疾病的人兽共患的病原，它是引起人类溶血性肠炎(HC)和溶血性尿毒综合症(HUS)的主要病原，在儿童，还可引起儿童的急性肾衰竭。家养反刍动物，尤其是奶牛、绵羊、山羊，已成为引起人类发病的主要宿主来源。健康绵羊的肠道中含有多种血清型的STEC，西班牙Lugo市大肠杆菌参考实验室(Laboratório de Referencia de Escherichia coli，LREC)统计数据显示，健康绵羊肠道分离到的STEC覆盖50种不同的O血清型、101种O∶H血清型，然而，只有极少的血清型是世界各国所分离的常见血清型，包括O5∶H-，O91∶H-，O103∶H2，O128∶H2，O146∶H8。O157、O26并不是绵羊肠道中STEC的优势血清型，而非O157引起人类发病的报道也越来越多。　　 1.健康绵羊体内产志贺毒素大肠杆菌的分离与毒力基因鉴定　　 基于本实验室已经建立的STEC O157∶H7 EDL933W株的stx1、stx2、eae、hlyA四个基因的多重PCR检测方法，并运用该多重PCR体系配合选择性增菌、分离培养等检测手段，探讨江苏省某地区健康绵羊体内STEC的带菌和流行情况。研究期间对江苏省某地区的特定绵羊场的健康绵羊群进行为期6个月连续跟踪调查，共采集550份粪样，分离到STEC菌株109株，分离率为19.8％，共出现41种O血清型、62种O∶H血清型，无法定型(ONT)22株，粗糙型(OR)1株，其中已见报道为绵羊体内携带STEC的优势血清型有O52株、O911株、O1031株，本研究分离的优势血清型为O93，为江苏地区的公共卫生及疾病预防提供参考。　　 2.STEC分离株λ噬菌体噬菌斑的筛选以及志贺毒素表达的鉴定　　 STEC的主要毒力因子—志贺毒素(Shiga toxin，Stx)由细菌基因组上的噬菌体编码，噬菌体在与细菌的相互作用中，能够改变宿主菌的表型、增强宿主菌的毒力，或使无毒力的菌株转变为致病菌，促进细菌种群遗传多样性的形成。本研究以109株志贺毒素基因阳性临床STEC分离株为受试菌株，用诺氟沙星对其进行诱导，通过双层琼脂平板法筛选噬菌斑阳性的菌株，既可以检测那些诱导后可以产生噬菌斑的菌株，又能够检测到诱导后不能产生噬菌斑的菌株，与之前的PCR方法互补，增强了筛选的敏感性及特异性。通过Vero细胞毒性试验确定志贺毒素的表达与否。　　 3.STEC优势分离株致病力的鉴定　　 根据本室已经建立的感染适应株的制备方法，挑选O93、O91分离株及参考菌株EDL933、K-12等5株细菌，以109菌落形成单位(colony forming unit，CFU)的菌量灌服3周龄ICR小鼠，从粪便中分离到的菌株，经PCR、血清型鉴定正确后，即为感染适应株。以此感染适应株，测定LD50，以确定所分离的菌株致病力大小，及致病力与志贺毒素的关系，为STEC引起的疾病的预防与控制提供参考。