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目的:IgA肾病(IgAnephropathy,IgAN)的基本病理特点是出现IgA或者以IgA为主的免疫复合物在肾小球的系膜区域和毛细血管袢沉积,同时其主要的组织学改变是肾小球系膜增生,是一种原发性的肾小球肾炎。IgAN发病率较高,并且最终可导致终末期肾病。近些年的研究中发现,肾素-血管紧张素系统(RAS)在IgA肾病疾病的发展过程中扮演着重要角色,而与其相互作用共同调节血压以及肾脏功能的激肽释放酶-激肽系统(KKS)同样发挥着重要作用。在肾脏局部存在较完整的RAS与KKS,两者互相作用,研究证明抑制RAS系统、激活KKS系统能够对肾脏进行有效的保护,并起到治疗作用,而血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme,ACE2)与脯氨酰羟基肽酶(prolylcarboxypeptidase,PRCP)做为RAS与KKS之间的重要连接点,在此过程中起到了重要作用。IgA肾病的具体发病机制尚未明确,临床缺乏治疗本病的针对性药物。导师郭登洲教授根据多年临床经验,提出了IgA肾病“气阴两虚,湿热并重”的理论,并据此拟以益气养阴清热祛湿方治疗本病取得了较好疗效。本实验通过制备IgA肾病大鼠模型,并观察益气养阴清热祛湿方对IgA肾病大鼠血管紧张素转换酶2以及脯氨酰羟基肽酶表达的影响,为应用益气养阴清热祛湿方治疗IgA肾病提供实验基础以及理论依据。方法:购买SD大鼠40只经过适应性饲养1周,将其随机分成Normal组(N组)、Model组(M组)、ZY组(Z组)以及Benazepril组(B组),每组各10只。除N组外,其余3组大鼠均予以IgA肾病大鼠动物模型的复制。具体操作如下:用蒸馏水将牛血清白蛋白(BSA)制成100g/L的溶液,隔日予以大鼠每只400mg/kg的BSA溶液灌胃,连续42天;每7天经皮下注射予以0.1ml四氯化碳(CCl4)以及0.5ml蓖麻油1次,连续63天;用生理盐水将脂多糖(LPS)制成0.25g/L的溶液,在第42以及第56天经尾静脉注射予以0.05mg,即0.2ml。N组中的大鼠隔日予以同等剂量的蒸馏水灌胃,共42天;经皮下注射予以生理盐水0.6ml,每7天1次,共63天;在第42以及第56天经尾静脉注射予以0.2ml的生理盐水。第64天起每日予以b组盐酸贝那普利灌胃,z组益气养阴清热祛湿中药灌胃,予以N组、M组相同剂量蒸馏水灌胃,持续56天。将大鼠饲养于代谢笼并留取各组大鼠模型复制的第1天以及第50、64、92、120天的24h尿并测24h尿蛋白定量(24hoursurinarytotalprotein,24h-UTP)。实验结束后处死大鼠,取大鼠肾脏,行HE、PAS、Masson、PASM染色以及免疫荧光,观察各组的肾脏病理变化;应用免疫组化法和逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)观察其ACE2和PRCP的表达变化。结果:1 益气养阴清热祛湿方对24h-UTP的影响:模型复制开始的第1天,N、M、Z、B各组之间无明显差异(p>0.05)。第50天,与N组相比,M、Z、B组的24h-UTP增多(p<0.05);m、z、b各组之间无明显差异(p>0.05)。第64天,与N组相比,m、z、b组的24h-UTP明显增多(p<0.05);m、z、b各组之间无明显差异(p>0.05)。第92天,与N组相比,m、z、b组的24h-UTP明显增多(p<0.05);与M组相比,z、b组的24h-UTP减少(p<0.05);z、b组之间无明显差异(p>0.05)。第120天,与N组相比,m、z、b组的24h-UTP明显增多(p<0.05);与M组相比,z、b组的24h-UTP明显减少(p<0.05);z、b组之间无明显差异(p>0.05)。2 肾组织病理学观察:光镜:N组的肾小球完整,系膜以及基质没有明显改变;M组大鼠肾脏的肾小球比较完整,但可见较为明显的系膜细胞增生以及系膜基质增多;z组与b组大鼠肾脏中均出现轻度的系膜细胞增生以及系膜基质增多,与M组相比程度较轻。免疫荧光:N组大鼠肾小球系膜区没有观察到免疫复合物沉积;M组大鼠肾小球系膜区可见较多的团块状免疫复合物沉积;z组与b组也可见团块状的免疫复合物沉积,但较M组表达量少。3 免疫组化法、rt-pcr观察肾脏中ace2、prcp的变化:3.1 免疫组化法观察大鼠肾脏组织中ACE2以及PRCP的表达情况较N组相比,M组、Z组以及B组3组大鼠肾脏组织中ACE2的阳性表达情况显著降低(P<0.05);较M组相比,Z组以及B组2组大鼠肾脏组织中ACE2的阳性表达情况明显升高(P<0.05);Z组与B组相比,2组大鼠肾脏组织中ACE2的阳性表达情况没有明显差异(P>0.05)。较N组相比,M组大鼠肾脏PRCP的阳性表达情况显著降低(P<0.05);较N组相比,Z组大鼠以及B组大鼠的肾脏组织中PRCP的阳性表达情况显著升高(P<0.05);Z组与B组相比,2组大鼠的肾脏组织中PRCP的阳性表达情况没有明显差异(P>0.05)。3.2 RT-PCR观察大鼠肾脏中ACE2 mRNA及PRCP mRMA的表达情况大鼠肾脏中ACE2 mRNA表达情况:与N组相比,M、Z、B组的表达减少(P<0.05);与M组比,Z、B组的表达显著升高(P<0.05);Z、B组之间没有明显差异(P>0.05)。大鼠肾脏中PRCP mRNA表达情况:与N组相比,M组中的明显降低(P<0.05);与N组相比,Z组、B组中的表达显著升高(P<0.05);Z、B组2组之间没有明显差异(P>0.05)。结论:1 益气养阴清热祛湿方可以较为明显的减少IgA肾病大鼠24小时尿蛋白定量,其治疗效果和贝那普利近似。2 益气养阴清热祛湿方可以减少肾脏组织的病理损伤,延缓本病病程的发展。3 益气养阴清热祛湿方可以明显提高ACE2以及PRCP在大鼠肾脏中的表达,提示益气养阴清热祛湿中药作用机制可能与抑制RAS系统、促进KKS系统有关。