本试验以感染花叶病毒的果蔗Badila和粤糖83-88的茎尖组织作为外植体通过直接诱导丛生芽，以及粤糖93．159的幼叶作为外植体通过诱导愈伤组织分化绿苗，获得了这3个品种的甘蔗组培苗。试验分别从诱导、分化、增殖、生根、移栽等方面，探讨了甘蔗组织培养过程中的适宜培养基及激素配比、酚污染等问题。同时还建立了甘蔗花叶病病原SCMV的RT-PCR、巢式PCR和核酸斑点杂交检测技术，并对甘蔗组培苗进行了SCMV检测，认为经胚性愈伤组织培养能高效率地获得脱除SCMV的甘蔗种苗。主要试验结果如下： 甘蔗组织培养，外植体取材以春秋季较好，夏季取材容易发生微生物污染和酚污染。外植体用自来水冲洗干净，先用75％酒精进行表面消毒30sec，再用0．1％升汞消毒8min或2％NaCl0消毒10min，最后用无菌水冲洗3-4次，有较好的防止微生物污染和酚污染的效果。 在茎尖诱导培养中，将甘蔗茎尖组织预先在无菌水中浸泡30min，以及根据外植体材料的褐变情况及时转移到新鲜的培养基中，采用液体培养等方法，能够减轻甘蔗茎尖组织酚害，提高诱导率。甘蔗茎尖诱导在MS+2．Omg/LBA+0．1mg/LNAA+30g/L蔗糖的成苗率最好，酚污染也很轻，分化苗移到1／2MS+1．0-3．Omg/LNAA+0．5-2．Omg/LIBA+50g/L蔗糖+0．05％活性炭培养基上，有利于促进甘蔗茎尖苗生根。分化苗增殖过程中，在所有条件相同的情况下，果蔗的增殖比糖蔗快。 在幼叶愈伤组织诱导培养中：在不含2,4-D的诱导培养基中，外植体不能脱分化而产生愈伤组织：2,4-D浓度为1．0-2．Omg/L时，能诱导产生较好的胚性愈伤组织，且对绿苗分化具较好的后效作用。在MS+I．Omg/LBA+0．5mg/LKT+30g/L蔗糖+0．7％琼脂培养基上，愈伤组织继代培养10～15天，继代次数为1次时，出芽分化效果最好；而后随着继代培养时间的延长和继代代数的增加，绿苗分化率下降明显。将愈伤组织分化出来的绿苗转入与茎尖苗增殖相同的增殖培养基，经过1～2代的增殖，愈伤组织分化绿苗生长势逐渐增强，最终与茎尖组培苗无显著差异。分化苗移到1／2MS+3,0-4．0mg/LNAA+1．0-2．Omg/LIBA+50g/L蔗糖+0．05％活性炭培养基上，有利于促进甘蔗愈伤组培苗生根。 在假植及移栽的过程中，甘蔗茎尖苗和愈伤组培苗在泥炭土和泥沙中移栽成活率很高，且糖蔗的移栽成活率比果蔗的高很多，分单株定植时果蔗和糖蔗的成活率都很高，达到了100％。 本试验采用引物对SCMV-R3、SCMV-F5，经过一步法RT-PCR可检测到0．01mg病叶中的SCMV；在RT-PCR目的片段内部再设计一对引物subl、sub2，进行巢式PCR可检测到相当于10ng病叶组织中所含的SCMV；而以SCMVCP基因片段为模板制备的DIG标记探针，核酸斑点杂交的检测灵敏度可达到0．4ng／／．tL重组质粒DNA，可成功地检测出甘蔗叶片样品中的SCMV，其检测灵敏度略低于RT-PCR，但对于大量样品检测，具有更经济、方便、快速的优点。 甘蔗组培苗在瓶苗阶段和移植早期SCMV含量太低，即使采用高灵敏度的巢式RT-PCR技术也不能检出其中的病毒，必须对生长一段时间(本研究为3个月)的移栽苗进行检测才能确证其真正无毒。 本试验采用RT-PCR和巢式PCR技术对茎尖组织培养获得的甘蔗组培苗进行了SCMV检测，发现通过茎尖培养获得的甘蔗组培苗中含有SCMV，没有脱毒；但在通过愈伤组织培养获得的甘蔗组培苗中未检测到SCMV，初步确定此组培苗为脱毒苗。