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坏死梭杆菌（Fusobacterium necrophorum,Fn）是一种严格厌氧的革兰氏阴性多形态杆菌。其致病力因子包括内毒素、白细胞毒素、血小板凝集因子、血凝素和溶血素等,主要致病因子是白细胞毒素。由坏死梭杆菌引起的疾病在不同国家和地区均有发生,鹿、羊等反刍动物感染坏死梭杆菌时表现为跛行、关节肿大、肝脓肿和“腐蹄病”。本研究于湖北省某鹿场采集病料,分离鉴定一株坏死梭杆菌,制备亚单位疫苗,旨在为临床治疗和预防反刍动物坏死杆菌病提供参考依据。1.坏死梭杆菌的分离与鉴定为确定湖北省恩施自治州某鹿场蹄腐烂病鹿（编号:052）病因,从于患病梅花鹿的腐烂蹄病健结合处采集病料,分离到一株专性厌氧菌。对分离菌进行形态观察、生化试验、16Sr RNA基因序列测定、细菌生化鉴定仪鉴定、药物敏感性试验以及毒力检测。该细菌是革兰氏阴性长短不一的杆菌。16Sr RNA基因序列测定与生化试验鉴定其为坏死梭杆菌。根据白细胞毒素启动子区保守区域进行分子生物学鉴定为f亚型,命名为HNFnf;小鼠感染试验表明,腹腔注射该细菌LD50为6×1014 cfu;药敏试验结果显示,该菌对青霉素、头孢类等中度耐药,对氨基糖苷药物完全耐药,为临床坏死杆菌病的治疗提供了基础数据。2.家兔肝脓肿模型的建立本试验用鹿源坏死梭杆菌HNFnf分离株以不同梯度cfu于家兔耳缘静脉注射,建立坏死梭杆菌家兔感染模型。最低致死量为1.2×1014cfu,攻毒家兔7d全部死亡,死亡前家兔表现采食减少、喜卧和消瘦。解剖死亡家兔可见肺脏表面大量出血;肝脏形成均匀的灰黄脓肿;脾脏肿大;肠道胀气、膀胱积尿等。病理组织学结果肝脏脓肿蓝染周围炎性细胞浸润,肝小叶结构消失,肝脏细胞脂肪变性;肺泡内有粉红色纤维素渗出等,为后续疫苗评价提供了理论依据。3.坏死梭杆菌亚单位疫苗的制备与评价通过裂解菌体的方法获取细菌胞内蛋白,并以此作为免疫原参照《兽用生物制品规程》制备疫苗。同时制备全菌灭活疫苗,对两种疫苗进行初步比较。疫苗评价标准参考已建立的家兔肝脓肿模型。两种疫苗的制备为临床预防坏死杆菌病和后续新疫苗的研制提供了参考依据。