超声联合微泡介导胰腺癌细胞基因转染的实验研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Sqiwei
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目的:研究超声联合微泡介导增强型绿色荧光蛋白质粒pEGFP-N1对人源胰腺癌细胞Panc-1转染的有效性及安全性,探讨超声参数(声强、辐照时间)对转染效率及细胞活率的影响,并对超声联合微泡造影剂增强转染的机制进行初步研究。 方法:以不同辐照时间(声强固定)及不同声强(辐照时间固定)辐照Panc-1细胞,分析转染效率及细胞活率进行参数优化;声诺维微泡制备后与质粒DNA混合,加入到Panc-1细胞后,接受不同条件的超声辐照(单纯质粒组,质粒+微泡组,质粒+超声组,质粒+微泡+超声组),流式细胞仪、激光共聚焦显微镜分析转染效率,胎盼蓝染色法测定细胞活率;以超声辐照(对照组,微泡组,超声组,超声+微泡组)Pane-1细胞,分析其对FITC大分子的摄取来评估对细胞膜通透性的影响;以超声联合微泡辐照质粒DNA后,行琼脂糖电泳,分析其对质粒的影响。 结果:当声强固定时,转染效率随辐照时间增加而增高,细胞活率随之减低,而当辐照时间固定时,转染效率随声强增加而增加,细胞活率随之减低;在无超声辐照时,pEGFP-N1在Panc-1细胞中无明显表达,超声辐照后,表达量增多,超声联合微泡辐照后,EGFP表达显著增多(P<0.01)。各组间细胞活性无明显差异(P>0.05);对照组、微泡组仅见极少量FD500阳性细胞,超声组阳性细胞百分率增高,超声联合微泡辐照组阳性细胞百分率明显增高(P<0.001);经超声联合微泡辐照后,pEGFP-N1质粒的电泳图谱无明显改变。 结论:超声联合微泡介导基因转染是一种新型的基因导入手段,显著增加了胰腺癌细胞的基因转染效率,安全、简便,具有良好的靶向性,运用前景广阔。
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