肝细胞癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,肝细胞癌的发生与许多因素有关,其中的一个重要因素就是乙肝病毒感染。乙肝病毒感染是一个重大的世界性问题,HBV导致肝癌发生的过程还不明确,但是长期乙肝病毒携带与肝细胞癌的发生有重大的关系。乙肝病毒有四个开放的蛋白表达框,其中表达的HBx在肝细胞癌的发生中起到重要的作用。HBx极大的促进了慢性肝炎向肝细胞癌的发展过程,但其致癌作用具体机制现在仍然存在争议。为了早期诊断、风险评估和预防治疗,需要进一步的找到和理解HBx导致肝细胞癌的分子机制。其中HBx导致的p16甲基化可能是肝癌发生、发展的重要原因。工作目的：通过制备稳定表达HBx的细胞株Chang-HBx和不表达HBx的细胞株Chang-vector,证实HBx蛋白介导p16启动子甲基化,导致p16蛋白表达下调,探讨HBx蛋白介导的p16启动子甲基化所导致的体外生物学效应,揭示肝细胞癌早期发生的重要事件。研究方法：通过脂质体转染的方法将pcDNA3.1B-HBx和pcDNA3.1B质粒分别导入Chang细胞,制备出表达HBx的单克隆细胞株Chang-HBx和不表达HBx的单克隆细胞株Chang-vector。半定量RT-PCR和免疫印迹的方法,分别在mRNA和蛋白质水平上监测Chang-HBx和不表达HBx的Chang-vector、Chang细胞的p16转录和表达水平。甲基化特异性PCR检测HBx对细胞中p16启动子甲基化的影响,然后通过CCK-8溶剂来观测三种细胞的增殖曲线,流式细胞仪来观察三种细胞的S期细胞在细胞周期中的比例,细胞凋亡率。研究成果和结论：HBx蛋白可以介导肝细胞的p16高甲基化,进而导致p16在mRNA和蛋白水平上表达均下降。表达HBx蛋白的细Chang-HBx胞生长速度增快,细胞周期中S期比例增加,细胞凋亡率下降。