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目的：从大鼠胎肝组织克隆GPC3基因,成功构建带绿色荧光蛋白报告基因的大鼠真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPC3N48-EGFP-GPC3C550,为深入研究GPC3的功能和应用奠定基础。方法：①根据已知的大鼠GPC3基因序列,设计相关引物,分析pGEM-T质粒、骨架质粒pcDNA3.1(+)和pGEM-T/EGFP质粒的酶切位点,在相应引物两端引入适合的限制性内切酶位点。②提取大鼠胎肝组织总RNA,采用RT-PCR方法扩增包含全长GPC3的基因片段,连入pGEM-T载体,经过蓝白筛选,挑细菌克隆。经菌液PCR及测序鉴定,得到pGEM-T/RGPC3-Long质粒。③以pGEM-T/GPC3R-Long质粒为基础,应用相应的引物依次构建带有全长GPC3基因的pGEM-T/GPC3ORF质粒、截短的GPC3-N端pGEM-T/GPC3N48质粒和GPC3-C端pGEM-T/GPC3C550质粒。④上述质粒和已保存的pGEM-T/EGFP质粒,经双酶切、连接和转化,依次将基因片段GPC3-N48、EGFP和GPC3-C550插入到pcDNA3.1(+)中,构建带有绿色荧光蛋白的大鼠真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPC3N48-EGFP-GPC3C550,采用双酶切和基因测序鉴定。结果：①成功从大鼠胎肝组织扩增包含全长GPC3基因;②成功构建重组质粒pGEM-T/RGPC3-Long、pGEM-T/GPC3ORF、pGEM-T/GPC3N48、pGEM-T/GPC3C550;③基于上述基础,构建带绿色荧光蛋白的大鼠真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPC3N48-EGFP-GPC3C550,并鉴定成功。结论：成功构建带绿色荧光蛋白报告基因的大鼠真核表达载体pcDNA3.1(+)/GPC3N48-EGFP-GPC3C550,为深入研究GPC3功能及应用奠定基础。