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该文主要分两部分,一是以T型细胞质雄性不育系T75-3369A及其保持系75-3369B为材料,提取线粒体DNA,纯化后,分别用限制性内切酶BamHI,EcoRI,HindIII进行完全酶切,电泳后转移到尼龙膜上.以来自月见草、小麦的线粒体基因atp6,nad3/rps12,coxI为探针与酶切片段进行杂交,以揭示T型细胞质雄性不育系与保持系线粒体基因组的组成差异.杂交图谱显示在3种探针、酶切组合中,除nad3/rps2/HindIII未检测到差异外,其余均有差异.75-3369A和75-3369B的这些基因及基因序列在组织结构上的没暗示着这些区域里可能存在异常的基因,导致CMS.二是利用花粉管通道法把mtDNA文库克隆片段导入到小麦植株中,把能使不育系恢复育性的保持系的mtDNA文库克隆片段252测序,并在GeneBank中进行Blast相似性查询.证实该克隆片段大小为1757bp,比脱辅基细胞色素B(cob)基因的3端少50个碱基,根据cob基因两端5上游和3下游序列设计特异引物,以不育系和保持系mtDNA为模板进行PCR扩增均长度为1822bp.扩增结果表明不育系和保持系mtDNA中均能扩出1822bp的条带.回收1822bp的扩增产物连接到pGEN-T载体上进行DNA序列分析,序列分析结果表明不育系和保持系的cob基因存在差异.