论文部分内容阅读
目的:细胞黏附及移行是角膜上皮创伤愈合的关键步骤,该过程依赖于整合素(integrin)及其配体纤维连接素(fibronectin)的信号作用系统。在细胞黏附于细胞外基质的过程中,活性氧(Reacive oxygen species,ROS)是整合素信号系统所必需的胞内产物。本研究旨在通过体外实验观察外源性低浓度过氧化氢(hydrogen peroxide,H2O2)对兔培养角膜上皮细胞黏附及移行作用。 方法:采取新西兰大白兔的角膜缘作为原代细胞培养的组织片。除培养细胞外,本研究实验均使用无生长因子以及无血清的培养液。四甲基偶氮比色(measurement of trititaed thymidine incorporation,MTT)细胞活力测试法用于检测外源性H2O2(0,1,5,10,20,50,60,和70μM)作用兔角膜上皮细胞2小时及24小时后的细胞活性。在适宜H2O2浓度范围内,黏附离心法用于测试黏附30和60分钟后的细胞数量。在此基础上,进一步用抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)作为外源性H2O2拮抗药,再测试黏附细胞的数量。选取最佳H2O2浓度组与非H2O2处理组,拍照记录两组细胞黏附15,30,以及60分钟时的细胞形态,以比较两组的变化差异。免疫荧光法被用于以上两组细胞在30分钟时的黏着斑蛋白(vinculin),以及丝状肌动蛋白(F-actin)表达的测定。离体创伤愈合实验证明外源性低浓度H2O2对培养的细胞移行,以及创伤愈合的作用。 结果:本研究的所有实验取用原代培养的兔角膜上皮细胞第2~3代。低于50μM的外源性H2O2作用细胞2小时及24小时,不降低细胞活性;而70μM H2O2则显著性地下降细胞活性(p<0.05)。黏附离心法结果显示,低浓度H2O2对细胞黏附30和60分钟时的促进作用具有明显的剂量依赖关系:5~50μM H2O2显著性地促进细胞黏附(p<0.05),其中20μM是促进的峰值;而60μM H2O2抑制细胞黏附(p<0.08);NAC可显著性地拮