益气活血法对衰老模型小鼠免疫功能的作用研究

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目的探讨益气活血药对小鼠衰老模型免疫功能的作用研究,通过观察益气活血药对D-半乳糖致衰老小鼠的免疫功能的影响,以期探讨气虚血瘀和衰老的关系以及为临床使用益气活血法延缓衰老提供实验依据。方法取昆明种清洁级小鼠60只,体重20±2克。适应性喂养1星期后,称重标记,随机分为6组,正常对照组:标准饲料,自由饮水、摄食。D-半乳糖造模组:每只小鼠每日颈背部皮下注射D-半乳糖(100mg/kg·d)一次。益气活血药给药组按0.1ml/10g·d给药(中药大、中、小剂量组药物煎煮浓缩后浓度分别为2g/ml,1g/ml,0.5g/ml)及维生素E组(50mg/kg·d)。给药组与VitE组从造模后第10日起开始按上述分组计量灌胃治疗。42天后取材测定小鼠胸腺指数、小鼠脾脏、胸腺的超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、小鼠脾淋巴细胞IL-2的含量、小鼠脾细胞悬液中CD137阳性细胞比例、胸腺超微结构。结果1.对小鼠胸腺重量指数及组织超微结构的影响维生素E组、中药各剂量组胸腺重量指数有增高的趋势,正常组、中药各剂量组、维生素E组与衰老模型组有非常显著性差异(P<0.01);中药大剂量组与维生素E组有显著差异(P<0.05)。提示中药各剂量组和维生素E组对衰老模型小鼠的胸腺重量指数有提高的影响,且中药大剂量组优于维生素E组。在形态观察方面正常组的胸腺组织结构清晰、正常,衰老模型组的胸腺组织结构明显差异,分界不清,免疫细胞减少,淋巴细胞溶解,染色质变浅,在同倍数视野下与正常对照组比较明显减少,细胞器形态结构异常,如核、浆比例减少,核固缩,线粒体空泡化,有个别胞核分裂等,使用中药后,这种变化有了不同程度的改善。如细胞数量变多,细胞器增加等。2.对小鼠脾脏和胸腺SOD活性的影响就胸腺SOD活性而言,模型组与正常组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组、维生素E组与衰老模型组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组与维生素E组比较无差异(P>0.05),中药各剂量组之间无差异(P>0.05)。结果表明,维生素E组与中药各剂量组均对衰老模型小鼠的胸腺SOD活性有明显提高。就脾脏SOD活性而言,模型组与正常组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组、维生素E组与衰老模型组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药大剂量组与维生素E组比较有显著差异(P<0.05)。结果表明,维生素E组与中药各剂量组均对衰老模型小鼠的脾脏SOD活性有明显提高,且中药大剂量组优于维生素E组。3.对小鼠脾脏和胸腺MDA含量的影响模型组胸腺MDA较正常组有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组、维生素E组与衰老模型组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药大剂量组与维生素E组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组之间有非常显著性差异(P<0.01)。结果显示,维生素E组和中药各剂量组对衰老小鼠胸腺MDA含量有降低作用,中药大剂量组优于维生素E组、中药中、小剂量组,维生素E组又优于中药小剂量组。模型组脾脏MDA较正常组有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组、维生素E组与衰老模型组有非常显著性差异(P<0.01);中药大剂量组与维生素E组有非常显著性差异(P<0.01);中药各剂量组之间有非常显著差异(P<0.01)。结果显示,维生素E组和中药各剂量组对衰老模型组的脾脏MDA含量有降低作用,且中药大剂量组优于中药中、小剂量组与维生素E组。4.对小鼠脾淋巴细胞IL-2浓度的影响模型组较正常组有非常显著性差异(P<0.01);中药大、中剂量组与衰老模型组比较有非常显著性差异(P<0.01),维生素E组、中药小剂量组与衰老模型组比较有显著差异(P<0.05);中药大剂量组与维生素E组比较有显著差异(P<0.05)。结果显示,衰老模型成立,中药各剂量组、维生素E组对衰老模型组小鼠的IL-2浓度有所提高,中药大剂量组优于中药小剂量组和维生素E组。5.对小鼠脾细胞悬液中CD137阳性细胞比例的影响模型组较正常组CD137阳性细胞比例有非常显著性差异(P<0.01);中药大、中剂量组与衰老模型组比较有非常显著性差异(P<0.01);中药大剂量组与维生素E组有显著差异(P<0.05);中药各剂量组之间无差异。结果表明,中药各剂量组和维生素E组可以提高衰老模型小鼠CD137阳性细胞的比例,且中药大剂量组优于维生素E组。结论1.使用D—半乳糖致小鼠衰老模型造模成功,而理想的测定衰老免疫指标变化的动物实验模型是此次实验的基本前提。我们从实验结果中可以看出,衰老模型小鼠的胸腺重量指数、脾脏和胸腺SOD、脾淋巴细胞IL-2含量、CD137阳性细胞比例较正常对照组均有不同程度的降低,脾脏和胸腺MDA含量有所升高,该模型成立。2.益气活血药能有效提高衰老小鼠的胸腺重量指数、脾脏和胸腺SOD、脾淋巴细胞IL-2含量、CD137阳性细胞比例,降低脾脏和胸腺MDA,改善胸腺超微结构,即益气活血药对衰老机体的免疫功能有改善作用,其机制有待进一步研究。从而亦反证,在衰老过程中气虚血瘀是其重要病机,益气活血法是延缓衰老的有效途径。
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