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本实验以新红星苹果为研究材料，采用CTAB法成功的从苹果果实里提取了高质量的RNA。利用MMLV反转录酶把总RNA中的mRNA反转录成cDNA，用特异引物进行LD—PCR扩增合成双链cDNA。然后用CHROMA SPIN—400Column对cDNA进行分级分离，去除小于500bp的cDNA片段。用带有粘性末端双链cDNA与λ Trip Ⅰ Ex2载体连接，利用λ噬菌体包装蛋白对合成的双链cDNA进行体外包装。包装产物侵染E.coli XL-Blue后构建cDNA文库，最后进行文库的扩增。该cDNA文库的滴度为1.191×10~6，文库的克隆数为1.112×10~6，扩增后滴度为1.532×10~10，插入片段平均大小在1 kb左右，蓝白斑筛选证实其重组率大于95％。同时，由于反转录过程中采用附加序列的方法使全长mRNA得到反转录，所以得到的cDNA是完整的，完全符合cDNA文库的要求。本实验成功构建了新红星苹果果实cDNA文库。