短短芽胞杆菌ch2-22发酵动力学与水分散粒剂的研究

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本课题组从土壤中筛选得到短短芽胞杆菌ch2-22,研究室前期试验结果表明该菌株发酵能够产生抗菌物质,3 kDa的短杆菌肽,可以有效抑制灰霉病原菌、炭疽病原菌、叶枯病原菌等多种病原真菌,具有广谱的抗真菌活性,且应用试验结果也表明ch2-22发酵液对黄瓜灰霉病、棉花枯萎病具有很好的防治效果,对植物生长有明显的促进作用。本研究主要对短短芽胞杆菌的发酵工艺进行优化,并建立其分批发酵动力学模型,然后对其生物制剂水分散粒剂的配方进行优化。1、通过单因素试验,确定了发酵培养基的基本组分,在单因素试验基础上进行响应面设计优化,通过Plackett-Burman试验确定对菌体生长的显著性因子:淀粉、豆饼粉和蔗糖,然后使用单因素试验方法确定最佳发酵条件。得到的优化发酵培养基为淀粉35.05 g/L,豆饼粉26.08 g/L,蔗糖10 g/L,鱼粉5 g/L,NaCl 1 g/L,MgSO4 0.3 g/L,(NH42SO4 3 g/L,MnSO4 0.1 g/L,K2HPO4 3 g/L,酵母膏1 g/L,CaCO3 2 g/L。培养条件为温度32℃℃℃,转速180 r/min,装液量100 mL/500 mL,接种量4%,初始pH为7.0,发酵时间45 h。优化后的芽胞数量达到8.1×109 cfu/mL,与优化前的芽胞数量(1.6×109 cfu/mL)相比,提高了3.7倍,优化后发酵液效价达到2335 IU/mL,提高了94.5%,高于同类菌株的1200 IU/mL。2、在优化后的发酵培养基与培养条件基础上,在5 L发酵罐中进行分批发酵,测定发酵过程中的菌体浓度、还原糖浓度和发酵液的抑菌活性,建立并验证了短短芽胞杆菌ch2-22分批发酵动力学模型,结果表明所得的动力学模型能够较好的反应其发酵过程。菌体生长动力学:(?)产物合成动力学:(?)底物消耗动力学:(?)3、通过对短短芽胞杆菌ch2-22菌株进行水分散粒剂助剂的筛选,确定了该菌株40%原药的水分散粒剂的最佳配方:短短芽胞杆菌菌粉40%、木质素磺酸钠20%、羧甲基纤维素钠1.5%、海藻酸钠25%、β-环糊精5%、高岭土8.5%。对其水分散粒剂样品进行指标检测,其芽胞数量为1.9×1010 cfu/g,崩解时间为170 s,悬浮率为85%,经过加速贮存试验,芽胞存活率达到90%,各项指标符合国家标准。
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