研究背景在《黄帝内经·九针论篇》中，“四时八风之客于经络之中，为瘤病也”提出正气不足六淫外邪停留经络而成瘤病的病机，乳腺肿瘤多因肝经不通、正气不足外邪侵袭所致[1]。乳腺癌是女性排名第一的常见恶性肿瘤，美国临床医师癌症杂志公布的最新统计数据显示，美国2011年有230480例女性患乳腺癌，占女性新发恶性肿瘤30%[2]。我国北京、上海、天津等大城市的统计显示，乳腺癌同样是我国女性最常见的恶性肿瘤，且发病率呈逐年上升趋势。近年的研究发现，乳腺癌的发生发展与内分泌肽直接相关[3]。神经内分泌肽是机体内分泌、旁分泌或自分泌等器官或活细胞分泌的活性多肽，这些多肽的成熟需要9种原蛋白转变酶（Pro-protein Convertases, PCs）的互相协同作用，在时间和空间上加工神经内分泌肽前体蛋白（原蛋白）在特定组织和细胞中的成熟[4]。原蛋白转变酶2基因（pc2）是细胞的正常基因，PC2酶介导的加工体系在乳腺癌中呈现低水平，这种变化与肿瘤形成、发展和凋亡等密切相关[5]。本研究通过上调pc2基因表达，研究乳腺癌细胞的增殖状态。研究目的研究pc2基因上调对乳腺癌细胞增殖的影响，为乳腺癌的治疗提供新的研究方向。研究方法自大鼠垂体组织中提取RNA，经过RT-PCR、重组载体转化和筛选等手段，结合琼脂糖凝胶电泳对重组的pc2和7b2基因进行鉴定。通过质粒抽提试剂盒（小量）和离子交换柱（大量），将重组的基因提取并纯化。用脂质体介导的基因制剂，将基因导入癌细胞。用Western blot技术分析PC2蛋白的表达。通过MTT法和荧光免疫等体外实验分析pc2基因对癌细胞增殖的作用。通过pc2基因制剂的Ex vivo和In vivo小鼠体内实验，评价癌细胞在体内的增殖。研究结果本研究在成功构建重组pc2和7b2基因的基础上，利用脂质体介导技术将pc2基因转染进入癌细胞。Western blot的结果显示，转染了pc2和7b2基因的4T1细胞，其蛋白的表达量比野生型4T1细胞的表达量高。这说明了基因成功转染进入细胞中。MTT的体外抑制实验结果显示，随着pc2和7b2基因转染的量的增加，癌细胞的增殖受到抑制。在免疫荧光的实验中，转染了pc2和7b2基因的细胞其细胞核破碎，而野生型的细胞细胞核保持圆形。在小鼠体内注射转染了基因的癌细胞后，对照组的7只老鼠都长了肿瘤，而pc2和7b2组的小鼠只有一只长出了肿瘤。对荷瘤小鼠体内进行基因治疗时，pc2和7b2组的肿瘤其生长受到抑制，而对照组的肿瘤随着时间的推移而增长。结论pc2基因的上调可以抑制乳腺癌细胞的增殖，呈剂量依赖性。