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大量研究表明肥胖症可以引起高血压、糖尿病、冠心病等多种慢性疾病,已成为全球性严重的公共卫生问题。红茶是世界上消费最多的茶类,许多研究表明红茶具有降脂减肥的效果,茶黄素可能是其降脂减肥的重要功效成分。本论文通过对茶黄素单体的分离制备、热稳定性和碱稳定性研究,以及茶黄素对大鼠降脂减肥效果的研究,取得了下列研究成果:
1.大孔树脂层析法联合半制备液相色谱分离制备四种茶黄素单体:茶黄素(TF1)、茶黄素-3-没食子酸酯(TF2A)、茶黄素-3’-没食子酸酯(TF2B)、茶黄素-3,3-双没食子酸酯(TF3)。大孔树脂分离茶黄素优化工艺参数如下:AB-8大孔树脂对TF40(茶黄素约占50%)进行吸附后,用20%、30%、40%、50%和60%的乙醇溶液以2 BV/h速度梯度洗脱,得到TF80(茶黄素约占80%),茶黄素回收率为60%。半制备高效液相色谱分离茶黄素单体最佳条件为:流动相为水:乙腈:冰醋酸(73.5:26:0.5,v/v/v);流速为5mL/min;茶黄素最大上样量为30 mg;每次分离耗时45 min,TF2A、TF2B和TF3的纯度大于90%,茶黄素回收率达50%以上。
2.茶黄素四种单体在4℃-135℃下的热稳定性研究表明:温度越高,茶黄素降解速度越大。茶黄素单体降解反应的活化能Ea越小则越不稳定,四种茶黄素单体在4℃-100℃热稳定性,由高到低依次为TF3,TF2B,TF2A和TF1。同理所得茶黄素四种单体在高温高压(110℃-135℃)条件下热稳定性,由高到低依次为TF2B,TF3,TF2A和TF1。TF2B和TF3稳定性比较接近,TF2A和TF1稳定性比较接近.而且高温高压下茶黄素降解速度更快。
3.对茶黄素在碱性条件下反应产物的研究表明:茶黄素复合物在碱性条件下反应13h时,在HPLC-MS图谱中TF1和TF2A之间出现新峰A,其分子量为729,与文献报道中的茶黄素-3-(3-O-甲基)-没食子酸酯(TF3MeG)分子量相符。茶黄素单体TF1在碱性条件下反应1h后在TF1的吸收峰之前出现新峰B,经LC-MS鉴定,未知物B的分子量为550,可能是和茶萘醌(TNQ)结构类似的一种物质。
4.采用不同含量的茶黄素样品:BTE(红茶提取物)、TF14(茶黄素约占14%)、TF40、TF80、TF1,进行大鼠肥胖防治实验.从血糖水平、胰岛素水平、血脂水平、脂质代谢酶体系、抗氧化酶体系等全方面探讨茶黄素降脂减肥的机理。
4.1茶黄素可以降低大鼠体重和脂肪积累。雄性SD大鼠经茶黄素灌胃15天后,茶黄素处理组的大鼠体重增长开始被显著抑制。灌胃31天后,与高脂组相比,TF1组和TF14组大鼠减重最多,大于9.00%:BTE组大鼠减少脂肪累积最多,脂体比比高脂组小30.93%;各处理组大鼠同高脂组大鼠相比显著减少了摄食量,但与正常组大鼠相比无统计学上差异。
4.2茶黄素可以调节大鼠血清和肝脏中的血脂水平。各处理组与高脂组相比,大鼠血清TC降低了1.77%-26.47%.TF80组血清TC降低最多,其次TT40组,再次TF1组。TF14组,最次BTE组。大鼠肝脏TC情况与血清的类似,TF40组、TFS0组的肝脏TC含量显著小于高脂组22.47%。各处理组大鼠血清TG与高脂组相比显著降低了24.61%-49.23%(p<0.01);各处理组大鼠肝脏中TG含量与高脂组相比有降低趋势。各处理组大鼠肝脏内的HDL水平比高脂组的显著提高了47.37%-126.32%(p<0.05),但是各处理组对血清HDL,水平无显著影响。
4.3茶黄素可以改善大鼠肝脏中脂质代谢。经茶黄素干预后,各处理组大鼠体内瘦素含量较高脂组下降了13.00%-29.15%,TF40效果优于其他处理。LPS活性比高脂组降低了13.52%-42.04%,TF1组抑制LPS活性最强;茶色素的含量越高,其抑制脂肪酶的活性越强。除TF14组之外,其余处理组大鼠肝脏中FAS含量显著低于高脂组24.07%-29.63%,TF40组抑制效果最好。各处理组对肝脏中FFA水平的调节没有显著影响。
4.4茶黄素可以改善大鼠体内血糖和胰岛素水平。各实验组大鼠的空腹血糖无统计学差异。各处理组大鼠空腹胰岛素水平较高脂组的降低了16.84%-55.79%,各处理组大鼠的胰岛素敏感系数(ISI)显著大于高脂组10.84%-54.84%,各处理组大鼠的ISI值大小顺序为:BTE组>TFl4组、TF1组>TF80组、TT40组。
4.5茶黄素可以改善大鼠血清和肝脏中的抗氧化酶系。各处理组大鼠血清和肝脏中的SOD酶活都大于高脂组的,TF1组大鼠血清和肝脏SOD酶活最高,优于其他处理组。各处理对血清CAT酶活没有显著性影响;除TF80组外,其余茶黄素处理组大鼠肝脏中CAT酶活高于高脂组3.17%-25.60%,且TF1组>TF14组>BTE组>TF40组。各处理对血清GSH-PX酶活没有显著性影响,但是肝脏中的GSH-PX酶活高于高脂组13.23%-45.00%;且BTE组>TF14组、TF40组>TF1组、TF80组。各处理组大鼠血清MDA水平比高脂组的降低了11.53%-30.09%:随着茶黄素含量的增加,大鼠血清MDA含量越低,即TF1组
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