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目的 肺癌是一种严重威胁人类健康和生命的疾病，转移和复发是造成绝大多数患者死亡的主要原因。β连环素(β-catenin)在上皮钙粘素-连环素复合体(E-cadherin/catenin complex)中参与构成一套完整的细胞粘附系统，同时它也是WNT信号转导通路中的重要分子。由于β-catenin在细胞粘附和增殖过程中的双重作用，已成为肿瘤发生发展机制研究中的热点。本实验应用免疫组化和Western Blot方法观察非小细胞肺癌中β-catenin以及磷酸化的β-catenin(phospho-β-catenin)表达及其与非小细胞肺癌组织学分型，分化，淋巴结转移及预后的关系。 材料与方法 1．材料 1．20例非小细胞肺癌标本分别来自中国医科大学附属第一临床医院2001-2002年及鞍山市肿瘤医院1980～2001年外科手术切除之原发性非小细胞肺癌组织。其中67例有术后随访记录。53例新鲜非小细胞肺癌和相应的正常肺组织标本由中国医科大学附属第一临床医院提供。 2．主要试剂 鼠抗人单克隆抗体anti-β-catenin(C19220-050)购于Transduction Laboratories公司。兔抗人多克隆抗体anti-phospho-β-catenin(#9561s，特异识别S33，S37，Thr41位点已磷酸化的β-catenin)购于Cell Signaling Technology公司。S-P超敏免疫组织化学试剂盒（KIT－9710）和DAB酶底物显色试剂盒（DAB－003）均购自福州迈新生物技术公司。碱性磷酸酶标记的羊抗鼠二抗（IE0070）和 BCIwNBT显色试剂盒（NBS821 12）购自华美公司。 3．方法 3．l 免疫组织化学S－P法检测p－catenin及nhosP6。－p－catenin蛋白表达。结果判定：p－catenin阳性表达定位于细胞膜。无着色为（－人阳性瘤细胞数＜90％为表达降低，＞90％为表达正常。20％以上瘤细胞出现胞浆和／或胞核表达为异位表达，异位表达和表达降低统归为异常表达。PhosPhO－p－catenin在细胞胞浆和／或胞核内出现棕黄色颗粒着色为阳性表达。阳性瘤细胞数＜＊％为正常表达；＞10％为异常表达。 3．2 Western Blot检测 p－catenin在正常肺组织中和非小细胞肺癌中的表达。取新鲜样品加人裂解缓冲液，剪碎、匀浆、超声处理，高速低温离心提取上清蛋白，电泳、转印，经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。实验结果进行灰度值测定。 4．统计学分析 采用 SPSS for Windows 10．0统计分析软件进行分析，对 p－catenin和phospho－p－catenin表达与临床病理因素的关系采用卡方检验和确切概率法。用Cox模型进行多因素分析。WesternBI毗结果的灰度值分析采用配对 t检验。P＜0．05为有统计学意义。 实验结果 1．免疫组化结果：120例 NSCLC中 p－catenin和 PhosPho－p－catenin异常表达率为80．0％和53．3％。两者的异常表达有明显的相关性。p－catenin在鳞癌和腺癌中的异常表达率分别为 ·2·76．7％和83．3阮，无明显差异。I、11期NSCLC和Ill、IV期NSCLC中p－catenin的异常表达率分别为82．7呢和77．9阮，无明显差异。高、中分化NSCLC中，p－catenin的异常表达率为69．2巩，明显低于低分化NSCLC的92．7％（P＝0．03）。有淋巴结转移和无淋巴结转移的NSCLC中p－catenin异常表达率分别为86．5％和69．6％，有明显差异（P＝0．044）。鳞癌和腺癌中PhOSPhO－p－catenin的异常表达率分别为31．7％和75．0％，有明显差异汀＜0．00）。I＊期肺癌和＊ ＊V期肺癌中 PhosPho－卜 catenin的异常表达率分别为 50．0％和 55．9％，无明显差异（P二 0．649人高、中分化及低分化肺癌中，PhosPho－卜catenin的异常表达率分别为 52．3％和 54．5％，无差异（P＝0．951人有淋巴结转移和无淋巴结转移的NSCLC中PhosPho－p－catenin异常表达率分别为sl．4％和 56．5％，也无明显差异（P。0．716八 COX模型多因素分析显示：术后生存期只与＊％u的临床分期（P＜0．OO＊和分化程度（P＝0．0）显著相关，p－catenin和 PhosPho－p－catenln的表达均不是影响 NSCLC预后的独立危险因素u＝0．316；P＝0．602）。 2．Western Blot实验结果：应用单克隆anti－p－catenin抗体检测，在 92 KD处可见特异性染色条带。对 53例肺癌及其自身正常肺组织WestemBlot检测结果进行灰度测定和分析，发现NSCLC中 p－catenin的含量明显高于正常肺组织（t＝2．935；P＝0．005）。 结 论 1．p－catenin的异常表达与NSCLC瘤细胞的分化负相关，与NSCLC淋巴结转移正相关。 2．Western Blot实验结果显示，NSCLC的 p－catenin表达明显 ·3·高于正常肺组织。 3·NSCLC中腺癌PhosPho－P－catenin的异常表达率明显高于鳞癌。 4·p－C。telllfl和 phOSphO－p。Cateflill不是影响 NSCLC预后的独立因素。