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为了研究猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)嗜性与靶细胞受体,以及个体抗病力与免疫相关基因遗传变异和表达差异的关系,本实验以五个不同猪品种的外周血分离的单个核细胞(PBMC)和其它组织样为研究材料,对PRRSV的受体基因CD163和CD169以及IL8、IL10、TNFα在不同猪品种和免疫相关组织中的表达情况进行了研究,以探讨其与PRRSV嗜性和不同猪品种抗病性的关系;同时还对CD163和CD169进行了生物信息学分析,预测其重要功能域;并对CD163和CD169基因的SNP位点进行了筛选,检测了免疫猪群体中SNP位点的多态性,分析了SNP基因型与免疫性状和抗体水平的相关性,以探讨作为抗病候选分子标记的可能性。主要研究结果如下:1、确定了从少量血液中分离PBMC的较优分离条件组合(肝素钠粉剂抗凝血液中,采用3000r/min离心25min),建立了少量血液中分离PBMC的技术,能获得较多和较高活力的PBMC,且红细胞和其它细胞杂质污染少。为PBMC细胞培养、细胞因子定量表达研究和疾病早期诊断等打下基础。2、登录GeneBank获得CD169和CD163 mRNA和氨基酸序列,初步分析了基因和编码蛋白的结构,预测了受体分子结合病毒粒子的重要功能域的编码区。对人、鼠、牛和猪的CD163的氨基酸序列进行比对,结果显示人、鼠、牛和猪的同源性很高,达到85%以上,但是跨膜区和胞内尾区变异很大,猪CD163分子的跨膜区由1038-1060氨基酸残基组成。对人、鼠、牛和猪的CD169的氨基酸序列进行比对,结果显示人、鼠、牛和猪的V-set domain同源性较高,猪CD169分子的V-set domain由20-136氨基酸残基组成,胞质尾区由1667-1730氨基酸残基组成,猪的胞内尾区由64个氨基酸残基组成,分别比人、鼠和牛多20、32和15个氨基酸。3、克隆了CD169基因338bp、276bp和1102bp的DNA片段,测序结果表明这些区域不存在变异。得到了该基因的部分内含子序列(intron19和intron20的序列),提交到NCBI,获得GenBank accession number EU240977。4、克隆了CD163基因293bp、219bp和938bp的DNA片段,测序比对检测到该区域存在4个SNP位点,分别为2439 A＞G、2454 G＞C、2537 G＞A和2685A＞C,选择其中2个SNP位点2537 G＞A和2685 A＞C在猪免疫群体进行了基因型分型和关联分析。5、应用CRS-PCR-HpaⅡ-RFLP检测分子标记CD163 2537 G＞A基因型,并进行关联分析,该SNP对0日龄的猪繁殖与呼吸综合症病毒(蓝耳病病毒)抗体、血小板分布宽度、血小板体积、大血小板比率、血小板和白细胞影响显著(P＜0.05)。6、应用CRS-PCR-BsiYI-RFLP检测分子标记CD163 2685 A＞C基因型,并进行关联分析,该SNP对仔猪断奶重、0日龄和17日龄的猪繁殖与呼吸综合症病毒(蓝耳病病毒)抗体、17日龄的猪瘟抗体存在显著影响(P＜0.05)。7、检测了CD163、CD169、IL8、IL10、TNFα在梅山、大白、长白、杜洛克和杜长大三元杂交共5个猪品种或猪群PBMC中RNA的表达量,细胞因子IL8在长白猪中表达量与杜洛克猪、三元杂交猪和梅山猪的表达量差异达到显著水平(P＜0.05);IL10在大白猪中表达量与梅山猪和三元杂交猪中的表达量差异达到显著水平(P＜0.05)。3个细胞因子IL8,IL10和TNFα在梅山猪PBMC中表达水平都较国外品种低。8、对CD163、CD169、IL8、IL10、TNFα在心、肝、脾、肺、肾、脑、骨髓、淋巴、睾丸、子宫、卵巢和PBMC共12个组织中RNA的表达情况进行了研究。CD163、CD169、IL8、IL10和TNFα在猪免疫器官和PBMC中广泛表达,受体CD163和CD169在可检出PRRSV的组织中广泛表达。9、对CD163和CD169基因进行了染色体定位。CD163基因定位不成功,同源性分析显示可能定位于猪5号染色体;CD169基因初步定位在猪17号染色体,与END03标记连锁。