【摘 要】
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水稻是一种重要的粮食作物,也是一种理想的单子叶模式植物。近20年来,随着水稻基因组测序的完成和研究技术的进步,人们在水稻功能基因组研究领域取得了一系列突破性的进展,这
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水稻是一种重要的粮食作物,也是一种理想的单子叶模式植物。近20年来,随着水稻基因组测序的完成和研究技术的进步,人们在水稻功能基因组研究领域取得了一系列突破性的进展,这在很大程度上依赖于水稻研究中大量突变体的获得。花器官作为水稻的生殖器官和产量单位,其发育的分子机制一直是科研工作者的重要研究对象。2012年出现的CRISPR/Cas9系统因其高编辑效率及低编辑成本和操作难度,取代了传统的非定向突变体获得方法如自然突变、物理化学诱变、T-DNA插入突变等和较老的定向编辑系统如ZFN和TALEN,成为被广泛使用的基因组定向编辑技术。为了研究茉莉素信号转导基因OsMYC2对水稻生殖发育的调控机制,本研究利用CRISPR/Cas9系统对水稻OsMYC2基因的N端和C端分别设计了1个靶点序列进行基因组定向编辑,在T0代获得了4个不同的9522OsMYC2杂合子突变株系。9522OsMYC2杂合子突变株系在后代分离中未出现纯合子突变株系,我们深入研究发现其突变花粉因营养核发育异常导致雄配子体传递过程出现问题。同时,为了获得OsMADS15基因的敲除突变体,以研究A类MADS-box基因在花器官发育中的功能,本研究利用CRISPR/Cas9系统对水稻OsMADS15基因第一外显子进行定点基因组编辑,并在T0代获得3个不同的9522Osmads15双等位突变株系,其蛋白序列发生了不同程度的变化,对其表型作的初步观察表明,发现所获得的3个不同的9522Osmads15突变株系具有异常的不育外稃等表型。本研究利用CRISPR/Cas9系统成功获得了水稻OsMYC2杂合子突变体,并初步研究了OsMYC2基因在雄配子体传递过程中的功能,为进一步研究OsMYC2基因在水稻生殖发育过程中的作用提供了基础;获得的9522Osmads15突变体为进一步开展OsMADS15调控水稻小穗发育的遗传学和调控网络研究提供了新的遗传材料。
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