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糖尿病是威胁人类健康的第三大疾病,可在初期阶段因无痛无痒,没有明显的症状,往往得不到早期的诊断和治疗,所以有待开发低侵袭性的早期诊断方法。唾液是人体重要的体液之一,可以作为诊断疾病的生物样品,但目前尚未有将其应用于糖尿病诊断的文献报道。本研究首次建立并完善了一种能够应用于人体唾液中氨基酸光学异构体定量的超高效液相(UPLC)-荧光(FL)分析方法。本文以人体唾液为生物样品,设计开发了D,L-丙氨酸(Alanine,Ala)、D,L-缬氨酸(Valine,Val)、D,L-亮氨酸(Leucine,Leu)3种D,L-氨基酸的UPLC-FL技术。以6-Aminocaproic acid(Internal standard;IS)为内标物,用荧光衍生化试剂R(-)-4-N,N-二甲基磺酰胺-7-(3-异氰酸吡咯烷)-2,1,3-苯并氧杂咪唑,即R(-)-DBD-PyNCS与3种D,L-氨基酸光学异构体以及3%的三乙胺在55℃下加热20分钟进行衍生化反应;用BEH C18(1.7μm,100mm×2.1 mmi.d.)色谱柱,以0.2%的甲酸水溶液和0.2%的甲酸乙腈溶液为流动相,进行梯度洗脱;利用UPLC-FL在激发波长(Ex):460 nm,荧光波长(Em):550 nm处进行衍生化产物的检测。在20分钟内3种D,L-氨基酸的分离度(Rs)大于1.5,达到了完全分离。标准曲线范围内线性关系良好(r2≥0.9988);最低检测限为10.0-200 fmol;日内、日间精密度RSD均小于10.44%;加样回收率为95.2-109.6%,均满足生物样品测定的要求。本方法准确、灵敏、可靠、专属性强,可用于人体唾液中3种D,L-氨基酸的定量。利用健康者及糖尿病患者的唾液,建立了3种氨基酸光学异构体定量分析方案,并探讨其在糖尿病诊断中的可行性。收集了 17名健康受试者的唾液(男性10名、女性7名);以HbA1c为诊断指标,收集了28名糖尿病受试者的唾液(男性15名、女性13名)。在受试的健康者及糖尿病患者的唾液中均检测出3种D,L-氨基酸。糖尿病症受试者唾液中的3种D,L-氨基酸平均含量明显高于健康受试者。健康者的男性与糖尿病的男性受试者的唾液中L-Ala、D,L-Val、D,L-Leu有显著性差异(p<0.05),而D-Ala没有显著性差异;全体健康者与糖尿病症受试者的唾液中D,L-Ala、D,L-Val、L-Leu有显著性差异(p<0.01),而D-Leu没有显著性差异。因此,L-Ala、D,L-Val、L-Leu的定量值可作为一种糖尿病症诊断的新的生物标记物。本研究通过对人体唾液中3种D,L-氨基酸的定量解析比对,不仅验证了在糖尿病诊断中的可行性,而且为糖尿病的早期预警提供了一种新的低侵袭性手段。