小胶质细胞不同程度低氧下TrKA的表达及梓醇对其影响

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目的:研究小胶质细胞不同程度低氧下TrKA的表达及梓醇对其影响。方法:以BV2细胞株代表小胶质细胞,在不同程度低氧及有无梓醇的情况下对其培养。应用间接免疫荧光细胞化学法、流式细胞术及Western-blot法分别对TrKA蛋白在小胶质细胞的表达进行定位、定量及定性研究。免疫荧光法中FITC标记的绿色荧光代表TrKA。流式细胞术用百分率来表示TrKA阳性细胞比例。Western-blot法用灰度值来表示TrKA及pTrKA的表达量(灰度值与蛋白表达量成正比)。结果:1.小胶质细胞在常氧培养下其膜上存在TrKA表达,低氧培养1.5hTrKA表达增加,而低氧培养14h时TrKA表达则降低。加入梓醇后使各低氧培养组的TrKA表达有所增加。2.小胶质细胞在常氧培养下TrKA阳性细胞比例为82.20±2.34%。低氧1.5h、4h后阳性细胞比例明显增多(P<0.05),分别可达87.27±0.42%、89.07±2.57%。随着低氧时间延长,TrKA阳性细胞比例显著下降(P<0.05),低氧8h和14h分别为77.57±0.96%、73.13±2.37%。各低氧培养的小胶质细胞加入梓醇后,TrKA阳性细胞比例均有明显增加(P<0.05),分别为90.63±1.17%、95.87±0.42%、84.07±2.60%、78.73±0.71%。3.小胶质细胞在常氧培养下有少量pTrKA表达,灰度值是0.94±0.02。低氧1.5h、4h pTrKA明显增加(P<0.01),其灰度值分别为1.94±0.73、4.58±0.44。随着低氧时间延长,pTrKA表达降低,低氧8h和14h灰度值分别为0.25±0.03、0.17±0.01,较常氧培养下降明显(P<0.05)。各低氧培养组加入梓醇后pTrKA的表达均有所升高(P<0.05),灰度值分别为2.18±0.57、8.62±0.53、1.15±0.05、1.37±0.24。结论:1.在小胶质细胞膜上存在TrKA蛋白,在正常情况下有少量磷酸化表达。2. TrKA蛋白表达量及其磷酸化水平与缺氧时间有关,低氧时间较短时(<4h),TrKA及pTrKA增多,随着低氧时间的延长,TrKA及pTrKA逐渐下降。3.低氧条件下,梓醇可促进小胶质细胞TrKA及pTrKA的表达。
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